【摘 要】
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目的 探讨血站标准存储条件下花生四烯乙醇胺(ANA)对血小板凋亡的抑制作用及相关机制.方法 取志愿者血小板,分别单独加入0.5 μmol/L ANA或联合加入0.5 μmol/L ANA和l μmol/L大麻素1型受体抑制剂利莫那班(Rimonabant,SR141716),在(22±2)℃水平振荡仪中振荡保存7d,同时设不加药物的血小板作为对照组.流式细胞术检测血小板膜磷脂酰丝氨酸(PS)表达水
【机 构】
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目的 探讨血站标准存储条件下花生四烯乙醇胺(ANA)对血小板凋亡的抑制作用及相关机制.方法 取志愿者血小板,分别单独加入0.5 μmol/L ANA或联合加入0.5 μmol/L ANA和l μmol/L大麻素1型受体抑制剂利莫那班(Rimonabant,SR141716),在(22±2)℃水平振荡仪中振荡保存7d,同时设不加药物的血小板作为对照组.流式细胞术检测血小板膜磷脂酰丝氨酸(PS)表达水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达;用细胞色素C(Cyt-C)检测试剂盒检测其从线粒体释放到胞质水平;免疫共沉淀法检测BCL-XL和Bak蛋白相互作用.结果 ANA处理组PS表达阳性率(早期细胞凋亡率)显著低于对照组[(8.29±1.44)％对(14.24±2.47)％];ANA处理组Cyt-C从线粒体释放到胞质的百分比显著低于对照组[(3.29±1.44)％对(15.24±3.40)％];ANA处理组血小板凋亡相关蛋白磷酸化(p)-Akt和p-Bad表达水平均高于对照组[(71.33±10.26)％对(35.00±6.00)％; (39.00±9.64)％对(10.33±1.53)％,P值均＜ 0.05];ANA处理组BCL-XL和Bak蛋白的结合量显著高于对照组(约为对照组的2.6倍);ANA处理组活化的caspase-9和caspase-3水平均显著低于对照组[(9.63±1.47)％对(23.24±2.47)％;(6.30±1.40)％对(13.20±2.50)％].ANA+ SR141716组各项检测指标与对照组结果相似,两组相比差异无统计学意义.结论ANA通过影响凋亡蛋白的表达水平,抑制Cyt-C释放到胞质使血小板免于凋亡而起到保护作用。
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