【摘 要】
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高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术是一种高效,快速,便捷的核苷酸检测方法.本实验从染料用量、模板浓度、产物片段长度3个方面探索了适宜HRM分析的最佳条
【机 构】
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吉林省农业科学院大豆研究所,长春,130033;东北师范大学生命科学院,长春,130024;中国科学院东北地理与农业生态研究所,长春,130102;吉林农业大学生命科学院,长春,130118
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高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术是一种高效,快速,便捷的核苷酸检测方法.本实验从染料用量、模板浓度、产物片段长度3个方面探索了适宜HRM分析的最佳条件,并利用HRM技术对单核苷酸(single nucleotide polymorphism,SNP)及插入/缺失(insertion-deletion,InDel)检测及基因分型等方面进行了分析.结果表明:10 μL反应体系中,20×Eva Green饱和染料加入0.1～0.3 μμL,模板浓度加入10～200 ng不影响HRM分辨率;扩增产物长度在70～190 bp范围内,插入/缺失片段长度3～13 bp范围内,高分辨熔解曲线均有较好的分辨效果.利用HRM分析技术检测分析F4个体基因型,结果与PAGE电泳分析完全一致.本实验结果说明,HRM技术与传统凝胶电泳基因分型方法相比,具有操作简单、分辨率高、准确快速、成本低等优点,是基因型鉴定的最佳选择.
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