【摘 要】
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目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyml stem cells,BMSCs)外泌体正常状态下对大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移的影响.方法 提取大鼠BMSCs并进行鉴定,将其与脑
【机 构】
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复旦大学附属闵行区中心医院 神经内科 上海 201100“,”上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 康复中心 上海 200437“,”上海中医药大学康复医学院 上海 201203“,”同济大学附属同济
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目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyml stem cells,BMSCs)外泌体正常状态下对大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移的影响.方法 提取大鼠BMSCs并进行鉴定,将其与脑微血管内皮细胞(bEnd.3细胞)通过Transwell小室共培养24 h(BMSCs共培养组);提取BMSCs外泌体进行鉴定,荧光显微镜下定性观察细胞吞噬外泌体的行为,CCK8法检测细胞活力选定最佳BMSCs外泌体工作浓度,将其与bEnd.3细胞共培养24 h(BMSCs外泌体共培养组).另设bEnd.3细胞单独培养组.培养24 h后通过EDU和细胞划痕实验,分别检测以上3组bEnd.3细胞的增殖和迁移能力.结果 第3代BMSCs表面CD90、CD29为阳性,CD45显示为阴性,可成骨、成脂,表明所提取的BMSCs纯度较高.透射电镜下BMSCs外泌体形态为类圆形,直径在100 nm左右;NTA分析发现BMSCs外泌体的直径分布范围为50～600 nm,其中粒径峰值为150 nm;免疫荧光显示内皮细胞能够吞噬BMSCs外泌体;CCK8显示20μg/mL外泌体加入对细胞增殖影响达到最佳.EDU检测显示,相较于对照组,BMSCs共培养组、BMSCs外泌体共培养组均可促进bEnd.3细胞的增殖(P<0.05),且促进增殖的能力相当(P>0.05).细胞划痕实验示,BMSCs外泌体共培养组细胞的迁移率高于对照组(P<0.05),但与BMSCs共培养组差异不明显(P>0.05).结论 BMSCs外泌体可代替BMSCs,有效促进脑微血管内皮细胞的增殖和迁移,并为卒中后的血管新生提供新的潜在治疗手段.
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