【摘 要】
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目的 制备壳聚糖交联SBA-15型介孔二氧化硅(SBA-15)固定化β-葡萄糖苷酶(β-G1c),促进淫羊藿苷高效转化为稀有宝藿苷Ⅰ.方法 采用吸附-交联法将β-G1c固定在壳聚糖交联SBA-15
【机 构】
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南京中医药大学附属中西医结合医院,江苏南京210028;江苏省中医药研究院,中药组分与微生态研究中心,江苏南京210028
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目的 制备壳聚糖交联SBA-15型介孔二氧化硅(SBA-15)固定化β-葡萄糖苷酶(β-G1c),促进淫羊藿苷高效转化为稀有宝藿苷Ⅰ.方法 采用吸附-交联法将β-G1c固定在壳聚糖交联SBA-15上,以载酶量和相对酶活力为评价指标,对其固定化条件进行优化;采用透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和N2吸附-脱附分析法对固定化酶进行表征,并对其酶泄露行为进行考察;以淫羊藿苷为底物,以游离酶为对照,考察固定化酶的最适酶解条件、酶解动力学和重复利用性.结果 制备交联SBA-15固定化β-G1c的最佳pH值为6.0,固定化时间为8 h,酶质量浓度为7 mg/mL;固定化酶的酶活力为439.2 μmol/(h·g),载酶量为1.120 g/g载体,最适酶解条件为pH 6.0,转化温度50 ℃,底物质量浓度0.5 mg/mL,转化时间8 h,酶解动力学参数最大反应速率(Vmax)为10.24 μg/min,米氏常数(Km)为16.15 mmol/L,重复利用5次后残余酶活大于80％.结论 制备的交联SBA-15固定化β-G1c载酶量高、转化能力强、重复利用性好,可用于高效获取宝藿苷Ⅰ.
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