小鼠B7-1cDNA克隆、测序、表达及其抗瘤效应的初步探讨

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用反转录PCR的方法,从BALB/c小鼠脾细胞中扩增出B7-1cDNA后,插入pcDNA3质粒中构建成小鼠B7-1cDNA的真核表达载体pCD-mB7.1,经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的B7-1cDNA的序列与文献报道一致.通过脂质体介导将pCD-mB7.1导入B7-1的小鼠黑色素瘤细胞系B16(F0)中,经RT-PCR和RNA斑点杂交初步证实B7-1在肿瘤细胞中获得了稳定有效的表达.同源小鼠脾淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养后采用LDH释放改良法测定淋巴细胞特异杀伤活性,结果显示,与野生型和模拟转染的B16细胞相比,B7-1基因转染的B16细胞能较有效诱导淋巴细胞产生针对野生型B16细胞的特异杀伤活性(p<0.02).这说明,将B7-1基因导入肿瘤细胞表达能提高其免疫原性,诱导有效的抗肿瘤免疫反应 B7-1 cDNA was amplified from BALB / c mouse spleen cells by reverse transcription PCR and inserted into pcDNA3 plasmid to construct the eukaryotic expression vector pCD-mB7.1 of mouse B7-1 cDNA. Identification and sequence analysis confirmed that the expression vector inserted B7-1 cDNA sequence consistent with the literature. PCD-mB7.1 was introduced into B7-1 mouse B16 cell line (F0) by lipofectamine. The results of RT-PCR and RNA dot blot showed that B7-1 was stable and effective in tumor cells expression. Lymphocyte-specific cytotoxic activity of splenic lymphocytes from mice homogenized with tumor cells mixed with tumor cells was measured by LDH release modification. The results showed that compared with wild-type and mock-transfected B16 cells, B7-1-transfected B16 cells The specific killing activity of lymphocytes against wild-type B16 cells was more effectively induced (p <0.02). This shows that the B7-1 gene into tumor cell expression can improve its immunogenicity, induce effective anti-tumor immune response
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