【摘 要】
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目的采用定点突变技术构建人血小板膜糖蛋白基因ITGA2B(2722 C>T)、ITGB3(1476 G>A)和GP1BA(523-525 delAAC)新突变点的真核细胞体外表达体系,并进行鉴定。方法 1)利用RT-PCR
【机 构】
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浙江省血液中心 卫生部血液安全重点实验室,
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目的采用定点突变技术构建人血小板膜糖蛋白基因ITGA2B(2722 C>T)、ITGB3(1476 G>A)和GP1BA(523-525 delAAC)新突变点的真核细胞体外表达体系,并进行鉴定。方法 1)利用RT-PCR法分别获取野生型ITGA2B、ITGB3和GP1BA基因的cDNA,通过TA克隆分别将目的基因连接到pcDNA-3.1/V5-His载体内,获得野生型表达载体并提取质粒;2)设计含突变位点的PCR扩增引物,采用Pfu
Objective To construct eukaryotic expression system of human platelet glycoprotein gene ITGA2B (2722 C> T), ITGB3 (1476 G> A) and GP1 BA (523-525 delAAC) by using site-directed mutagenesis. Methods 1) cDNAs of wild type ITGA2B, ITGB3 and GP1BA were obtained by RT-PCR. The target gene was ligated into pcDNA-3.1 / V5-His vector respectively by TA cloning to obtain the wild-type expression vector and the plasmid was extracted.2; Design a PCR amplification primer containing a mutation site using Pfu
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