【摘 要】
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目的 探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSVtk)基因表达及提高逆转录病毒滴度的措施。方法 将HSVtk基因插入逆转录病毒载体pRevTRE中 ,构建重组逆转录病毒载
【机 构】
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中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心,中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心,中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心,中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心 410078长沙,410078长沙,410078
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目的 探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSVtk)基因表达及提高逆转录病毒滴度的措施。方法 将HSVtk基因插入逆转录病毒载体pRevTRE中 ,构建重组逆转录病毒载体。通过微乒乓感染法导入包装细胞PA317中 ,以潮霉素B筛选克隆细胞 ,浓缩克隆细胞上清制备重组逆转录病毒。在不同时间及不同丁酸钠浓度下 ,检测分析经筛选获得阳性克隆靶细胞中有无HSVtk基因的表达及如何获得高滴度的重组病毒液。结果 成功构建了重组逆转录病毒载体RevTRE tk ,制备的重组病毒感染靶细胞后有HSVtk基因的表达。结论 通过微乒乓感染法在包装细胞PA317培养 30h和 10mmol L丁酸钠浓度下 ,经冷冻超速离心能获得携HSVtk基因的高滴度逆转录病毒颗粒 ,为其基因治疗的应用及研究奠定了基础。
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