【摘 要】
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目的:构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)真核表达质粒pcDNA3.1(-)/hIGF-1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性.方法:应用DNA重组方法将编码hIGF-1 cDNA克隆于真核表达载体pcD
【机 构】
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复旦大学附属华山医院运动医学科,上海,200040
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目的:构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)真核表达质粒pcDNA3.1(-)/hIGF-1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性.方法:应用DNA重组方法将编码hIGF-1 cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建pcDNA3.1(-)/hIGF-1真核表达质粒;应用阳性脂质体介导的基因转染技术,将真核表达质粒pcDNA3.1(-)/hIGF-1瞬时转染C2C12成肌细胞中;采用RT-PCR及免疫组化染色等方法检测hIGF-1基因在成肌细胞中的表达情况;应用MTT法检测转染后细胞上清液中hIGF-1的生物活性.结果:将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(-)/hIGF-1转染成肌细胞后,hIGF-1 mRNA及蛋白表达水平明显增高;转染后的成肌细胞培养上清液具有促使成纤维细胞增殖的生物活性.结论:成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(-)/hIGF-1,其转染成肌细胞后可获得较高水平hIGF-1蛋白的表达,所表达出hIGF-1蛋白具有生物学活性.
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