【摘 要】
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目的 探讨毛柳苷在缺血性脑损伤后对白介素4诱导蛋白1(interleukin-4 induced protein 1,IL4I1)表达及小胶质细胞极化的影响.方法 38只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(4只)、毛柳苷组(17只)和生理盐水组(17只).通过线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型(缺血60?min拔栓实现再灌注),再灌注10?min后,毛柳苷组与生理盐水组小鼠分别经尾静脉按照10?mg/kg剂量注射毛柳苷(1?mg/mL)与生理盐水,每天1次,持续28?d.ELISA法检测假手术组及模
【机 构】
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北京 100070 首都医科大学附属北京天坛医院,国家神经系统疾病临床医学研究中心
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目的 探讨毛柳苷在缺血性脑损伤后对白介素4诱导蛋白1(interleukin-4 induced protein 1,IL4I1)表达及小胶质细胞极化的影响.方法 38只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(4只)、毛柳苷组(17只)和生理盐水组(17只).通过线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型(缺血60?min拔栓实现再灌注),再灌注10?min后,毛柳苷组与生理盐水组小鼠分别经尾静脉按照10?mg/kg剂量注射毛柳苷(1?mg/mL)与生理盐水,每天1次,持续28?d.ELISA法检测假手术组及模型组缺血再灌注后48?h、7?d、28?d血清中的IL4I1浓度.采用神经元特异核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)抗体免疫荧光染色标记神经元,观察缺血再灌注后7?d脑梗死体积.采用CD16/32、CD206和离子化钙结合适配分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)免疫荧光染色观察缺血再灌注后7?d小胶质细胞极化状态及突起的长度、数量变化.通过细胞实验探究IL4I1与小胶质细胞不同表型之间的联系.培养小鼠BV2小胶质细胞,设置M0型细胞为空白对照组,使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和INF-γ诱导BV2细胞极化为M1促炎型,使用IL-4和IL-13诱导BV2细胞极化为M2抗炎型细胞.BV2细胞诱导48?h后提取细胞蛋白,通过免疫印迹检测BV2细胞不同表型中IL4I1的表达情况.结果 与假手术组相比,生理盐水组脑缺血再灌注后48?h血清中IL4I1浓度下降(P=0.0302);与生理盐水组相比,毛柳苷组脑缺血再灌注后7?d和28?d血清中IL4I1浓度增加(P=0.0229,P=0.0076).毛柳苷组脑缺血再灌注后7?d脑梗死体积较生理盐水组降低(P=0.0389).与生理盐水组相比,毛柳苷组脑缺血再灌注后7?d缺血区周围小胶质细胞突起长度、突起数量、突起的分叉点及终末端点数量均增加(P=0.0040,P<0.001,P<0.001,P<0.001),皮层与纹状体区域M1型小胶质细胞数量减少(P=0.0407,P=0.0032),皮层与纹状体区域M2型小胶质细胞数量增多(P=0.0206,P=0.0075).体外细胞实验BV2小胶质细胞不同表型中,M1型与M2型较M0型IL4I1表达下降(P=0.0008,P=0.0155),与M2型相比,M1型IL4I1表达更低(P=0.0406).结论 毛柳苷可能通过增加脑缺血再灌注损伤后血清及缺血脑组织中IL4I1的表达,并使激活的小胶质细胞向M2抗炎表型转化,减少脑梗死体积,从而发挥神经保护作用.
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