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将纯化的天然虎纹捕鸟蛛毒素-V经盐酸胍变性30min后，在pH3．0、反应温度为37℃的条件下与三羧甲基磷酸(TCEP)反应12min，用反相高效液相色谱分离得到其全部去折叠中间体，通过基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)进行鉴定，并利用烷基化反应对这些去折叠中间体予以进一步确证。根据其保留时间，分析虎纹毒素-V各去折叠中问体的色谱行为，初步探讨了多肽或蛋白质构象异构体反相色谱行为的多样性。