单点突变葡萄糖异构酶(GIG138P)基因在变铅青链霉菌中的高效表达及其稳定性研究

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangy1225
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通过三步亚克隆,将单点突变葡萄糖异构酶(GIG138P)基因及其调控序列插入链霉菌质粒pIJ4083,构建重组表达质粒pIJ4083-GI1.用重组质粒转化变铅青链霉菌TK54原生质体,经硫链丝菌素抗性(ThR)筛选,获得重组菌株TK54/pIJ4083-GI1.酶活力测定和SDS-PAGE分析表明,GIG138P基因在变铅青链霉菌中得到高效表达,GI1粗酶液比活力为15 U/mg,GI1表达量约占菌体可溶性蛋白的25%.同时也研究了重组质粒的遗传稳定性.重组菌株在无选择压力条件下经液体连续传代培养,GI1比活力和GI1表达量在200 h传代时间中呈平缓下降趋势.
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