论文部分内容阅读
目的
建立一种快速的IgG1型重组单克隆抗体(单抗)药物反相-超高效液相色谱肽图分析方法，用于IgG1型单抗专属性鉴别、质量控制和批检验放行。
方法选取4种IgG1型单抗(贝伐珠单抗、阿达木单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗)，经变性、还原、烷基化、Lys-C蛋白酶解后，终止反应，离心取上清用反相-超高效液相色谱法检测，评价方法的专属性、重复性、耐用性，并通过Xevo G2-XS QTof质谱进行方法确认及鉴定。
结果确定流动相为0.1%三氟乙酸/水和0.1%三氟乙酸/乙腈，色谱柱为Agilent Poroshell 120SB-C18型色谱柱(2.1 mm×150 mm，2.7 μm)，检测波长214 nm，柱温40 ℃，样品室温8 ℃，梯度洗脱时间为65 min。方法学验证结果显示空白对照无干扰峰存在，专属性良好；各特征峰的6次重复性相对保留时间的相对标准偏差为0.00%~0.19%；不同仪器、不同色谱柱、不同酶量及样品稳定性研究的结果显示各特征峰相对保留时间的相对标准偏差均