【摘 要】
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目的初步明确肝癌细胞中特异性表达缺失的DNA损伤修复基因(GADD45β)近端启动子序列,并探索双月安环己烷草酸铂(Oxaliplatin)对人肝癌细胞HepG2中GADD45β基因表达影响及可能
【机 构】
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上海第二医科大学附属瑞金医院外科上海消化外科研究所,Department of Medical Oncology & Therapeutic Research
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目的初步明确肝癌细胞中特异性表达缺失的DNA损伤修复基因(GADD45β)近端启动子序列,并探索双月安环己烷草酸铂(Oxaliplatin)对人肝癌细胞HepG2中GADD45β基因表达影响及可能机制.方法以30～50个碱基间隔体外人工合成GADD45β近端启动子序列(-547至-436),分别插入pGL3 basic荧光素表达质粒的荧光素基因上游,以电穿孔法转染HepG2,根据启动子活性强度结合TRANSFAC数据库分析可能存在的转录调节因子结合位点;以Northern印迹和实时荧光定量PCR比较Oxaliplatin作用前后HepG2细胞GADD45β表达,并在此基础上进一步比较Oxaliplatin对GADD45β启动子活性的诱导作用.结果GADD45β近端启动子中含有E2F-1(-470/-436)和核因子(NF)-KB(-547/-520)转录调节因子与启动子结合位点,并可能存在"抑制区".Oxaliplatin能明显诱导HepG2中GADD45β表达,并呈剂量-效应正相关关系,同时Oxaliplatin能相应诱导E2F-1启动子活性.结论Oxaliplatin能明显诱导肝癌细胞中特异性缺失的GADD45β基因表达,增强转录调节因子E2F-1的表达水平是其可能的作用机制.
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