论文部分内容阅读
利用甲醇诱导的醇氧化酶1（AOX1）启动子，构建了天然大麦α-淀粉酶／枯草杆菌蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的高水平表达系统。为了提高表达水平，在紧邻野生型编码区处设计了两种密码子优化的编码区并使之表达。利用来源于酿酒酵母的截短的α交配因子分泌信号，以保证天然成熟蛋白的分泌。利用PCR方法筛选AOX1基因被替换的单拷贝插入转化子，比较不同克隆的表达水平。经甲醇诱导后，野生型的表达水平为125mg／L，两种含有密码子优化编码区的突变株分别为65和125mg／L。纯化的重组蛋白通过埃德曼降解、液相色谱、质谱以及不溶