【摘 要】
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目的 既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关.为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚
【机 构】
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解放军总医院,北京,100853日本九州大学医学院第三内科;
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目的 既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关.为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES cells)并筛选同源重组克隆.方法 PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组ES细胞克隆.结果 将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescript SKⅡ+载体,SA-IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染ES细胞,Southern blot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的ES细胞克隆.结论 成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组型ES细胞,为下一步建立LRP16缺失型小鼠并为从整体水平研究LRP16基因的生理功能奠定基础.
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