【摘 要】
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目的：探讨靶向小鼠白细胞介素-6（IL-6）基因RNA干扰慢病毒载体颗粒（LV-IL6-RNAi）对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞IL-6表达的影响，及其对胶原诱导性关节炎（CIA）的治疗作用。方法：①设计合成3对特异性针对小鼠IL-6基因的小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）序列，筛选高效siRNA序列按慢病毒载体构建要求，构建高效LV-IL6-RNAi。②LV-
【基金项目】
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国家自然科学基金（81671603）； 山东省自然科学基金（ZR2016HM56）资助；
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目的：探讨靶向小鼠白细胞介素-6（IL-6）基因RNA干扰慢病毒载体颗粒（LV-IL6-RNAi）对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞IL-6表达的影响，及其对胶原诱导性关节炎（CIA）的治疗作用。方法：①设计合成3对特异性针对小鼠IL-6基因的小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）序列，筛选高效siRNA序列按慢病毒载体构建要求，构建高效LV-IL6-RNAi。②LV-IL6-RNAi感染小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞，并设慢病毒阴性对照（LV-NC-RNAi）、培养基空白对照，用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测J774A.1细胞的IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和IL-1βmRNA相对表达水平，以检测LV-IL6-RNAi体外干扰效率。③构建胶原诱导性关节炎模型（CIA），设LV-IL6-RNAi组、LV-NC-RNAi组、甲氨蝶呤（MTX）阳性对照组、PBS空白对照组，分别关节腔注射LV-IL6-RNAi、LV-NC-RNAi、腹腔注射MTX、PBS溶液，观测CIA小鼠关节炎评分，ELISA检测小鼠IL-6、IL-1β和TNF-α血清水平，组织病理检测炎症关节的炎性细胞浸润数量。结果：①成功构建了高效LV-IL6-RNAi。②在体外J774A.1细胞水平上，LV-IL6-RNAi组IL-6mRNA相对表达水平显著性低于LV-NC-RNAi组、培养基空白对照组（F=33.47，P<0.01）；而IL-1β和TNF-αmRNA相对表达水平组间无统计学差异（P>0.05）。③首次免疫注射后第28-35天成模，建模率为96.43％。首次免疫注射后第35天，CIA-LV-IL6-RNAi组关节炎评分开始降低，首次免疫注射后第42天，CIA-LV-IL6-RNAi组关节炎评分显著性低于CIA-LV-NC-RNAi、CIA-PBS组（F=10.05，P<0.01）；而CIA-LV-IL-6-RNAi组与CIA-MTX组之间无显著差异（t=0.19，P=0.85）。CIA-LV-IL-6-RNAi组IL-6、IL-1β及TNF-α血清水平显著性低于CIA-PBS组、CIA-LV-NC-RNAi组（F值分别为87.29、18.20、30.79；P均＜0.01）；而CIA-LV-IL-6-RNAi组与CIA-MTX组之间IL-6、IL-1β及TNF-α血清水平均无显著差异（P均>0.05）。CIA-LV-IL6-RNAi组和CIA-MTX组炎症关节病理切片高倍镜下炎症细胞的浸润数量均显著性少于CIA-LV-NC-RNAi组和CIA-PBS组（F=74.75，P<0.01），但CIA-LV-IL-6-RNAi组和CIA-MTX 组之间无明显差异（P>0.05）。结论：成功构建的高效LV-IL6-RNAi，可作为类风湿关节炎（RA）实验性基因治疗的有效手段。
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