【摘 要】
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目的建立恶性疟原虫纳米磁分离实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测恶性疟原虫,为输入性恶性疟防控提供技术支持。方法根据恶性疟原虫基因组18S rRNA保守区序列,设计并合
【机 构】
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北京国际旅行卫生保健中心; 国家纳米科学中心; 江苏省盐城市疾病预防控制中心; 中国检验检疫科学研究院;
【基金项目】
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国家质检总局科研基金(2012IK218);国家重大科学研究计划(2011CB932803)
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目的建立恶性疟原虫纳米磁分离实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测恶性疟原虫,为输入性恶性疟防控提供技术支持。方法根据恶性疟原虫基因组18S rRNA保守区序列,设计并合成引物和探针;构建质粒标准品,拟合标准曲线,采用纳米磁分离法提取核酸,建立恶性疟原虫纳米磁分离实时荧光定量PCR检测法,并进行该方法的灵敏度和特异性评价。结果与常规法(镜检法和快检法)相比,该方法检测恶性疟原虫更加灵敏,并具有良好的特异性,在(2.5×101~2.9×108)copies/ml拷贝数范围内循环阈值(Ct值)与质粒标准品拷贝数的对数值之间存在良好的线性关系(R2=0.999);应用该方法从非洲维和部队13名归国人员中检出1例低水平恶性疟原虫感染者,而常规法(镜检法和快检法)未检出。结论该方法能够快速准确地检测恶性疟原虫,在口岸低密度恶性疟原虫感染者的检测中具有很大的应用价值。
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