【摘 要】
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背景:LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关.目的:构建针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell)并筛选同源重
【机 构】
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解放军总医院,日本九州大学医学院第三内科
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背景:LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关.目的:构建针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell)并筛选同源重组克隆.设计:通过SA-PIES-βgeo插入小鼠LRP16基因组DNA构建插入失活型打靶载体.单位:日本九州大学第三内科生物调控研究室与解放军总医院分子生物室.材料:本实验所用主要材料由日本九州大学生物调控研究室提供.实验所用鼠基因组文库(mouse genomic library in pBeloBAC11 Vector)购自invitrogen公司,TopF10感化态细菌购自北京天为时代公司,pCDNA3.1(+)由本室保存.鼠胚胎干细胞株由日本九州大学提供.方法:实验主要工作于2004-11/2005-05在日本九州大学生物调控研究室与解放军总医院分子生物室完成.PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建捅入失活型打靶载体并转染胚胎干细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组胚胎干细胞克隆.主要观察指标:具有同源重组的胚胎干细胞克隆.结果:将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescript SKⅡ+载体.SA.IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染胚胎干细胞,Southern blot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的胚胎干细胞克隆.结论:成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组犁胚胎干细胞.
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