目的:构建熔解曲线分析法检测5种临床常见革兰阴性病原菌。方法:选取临床最常见的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽单胞菌作为目标检测菌种。对目标菌种设计种特异性引物。构建熔解曲线法,并进行特异性验证。检测不同拷贝浓度稀释液进行敏感性分析。检测临床分离目标菌各20株,进行稳定性评价。结果:(1)经预实验后,对Tm值差异较大的铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌三对引物同时进行熔解曲线分析,对大肠埃希菌、嗜麦芽单胞菌两对引物同时进行熔解曲线分析。(2)特异性验证显示,目标菌种均有特异性的熔解曲线,各自的Tm值依次为88.37、86.32、80.86和87.56、86.32℃。(3)可检测到的拷贝浓度稀释液约为3.0×103copies/mL。(4)稳定性评价的结果显示,Tm值变化范围窄小,差异有统计学意义。结论:所构建的熔解曲线法具有较好的特异性、敏感性和稳定性。