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摘要 [目的]建立苹果粉中五氯硝基苯能力验证的气相色谱-质谱（GC-MS）联用检测方法。[方法]通过采用不同的考核样品前处理方法，选用不同的萃取溶剂和净化方式，探索最有利于考核样品检测的前处理方法。[结果]在0.01～0.05 μg/mL浓度范围内，该方法线性关系良好，在0.01～0.05 μg/mL加标范围内其回收率为98.90%～110.00%。[结论]采用该方法进行五氯硝基苯的能力验证，能有效提高考核样品检测的准确度。
关键词 果蔬粉；五氯硝基苯；能力验证
中图分类号 TS207.5+3 文献标识码
A 文章编号 0517-6611（2018）14-0179-03
Study on the Ability to Verify the Quintozene in Apple Powder
ZHAO Li，ZHANG Ruiyu，LI Wenting et al （Kunming Municipal Center for Disease Control and Prevention，Kunming，Yunnan 650228）
Abstract [Objective]A multiresidue analytical ability was developed for determination of quintozene in apple by gas chromatomatographymass spectrometry （GCMS）.[Method]By using different pretreatment methods， different extraction solvents and purification methods were selected to explore the most favorable pretreatment method for sample inspection.[Result]In the concentration range of 0.01-0.05 μg/mL， this method had good linearity，in the 0.01-0.05 μg/mL standard within the scope of the recovery rate was 98.90%-110.00%.[Conclusion]Employing the method to verify quintozene can effectively improve the detection accuracy of test samples.
Key words Fruit and vegetable powder；Quintozene；Proficiency testing
随着国家对食品安全关注度的提高，食品安全风险监测已成为每年度检测工作的重要内容，而农药残留检测仍是食品安全风险监测的重要项目。近2年来果蔬中的五氯硝基苯（PCNB） 仍是农残检测的重要项目。五氯硝基苯属含氯有机氮保护性杀菌剂，化学性质稳定，不易挥发、氧化和分解，也不易受阳光和酸碱的影响，主要用于土壤和种子处理，在土壤中残效期长，使蔬菜、水果、中药材和饲料中时有残留[1-3]。
目前检测五氯硝基苯的方法有气相色谱法[4]、气相色谱-质谱联用法（GC- MS）[5] 、高效液相色谱法[6]。前处理方法通常为运用正己烷 （或石油醚）-丙酮多次提取，浓硫酸磺化法净化[7]，或采用硅镁吸附剂预处理小柱[8]、固相萃取或中空纤维膜液相微萃取技术[9]，虽然都取得了较好的效果，但由于反复提取的试剂较多，需经较长时间旋转蒸发，预处理柱也需经活化和淋洗，固相萃取及微萃取成本较高，在检测大批次样品时仍显不足。近年 QuEChERS前处理技术因其操作简单，成本低廉，有机试剂用量少，檢测时间短，被广泛应用于大批次农药残留检测中[10 -11]。2016 年，朱惠芳等[3]在农残分析中采用QuEChERS为样品前处理方法。该方法是运用一些高效的提取和净化试剂，通过简单的离心或柱分离，将农药成分与样品基质分离并通过此方法对样品进行提取和净化，但针对苹果粉中农药残留能力验证来说，以上方法仍不能有效提高样品检测的准确度[12]。因此针对基质相对简单的能力验证样品来说，以上方法都存在一定的提取损耗。笔者在以上研究的基础上进一步优化了苹果粉中农药残留能力验证样品检测的相关方法，以寻找到最有效、最有利于能力验证的方法，从而提高能力验证的准确度。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
果汁中五氯硝基苯内标质控样品（CFAPA-QC062B-12，大连中食国实检测技术有限公司）；五氯硝基苯（GSB05-1845-2016，批号201705）、顺式-环氧七氯（SB05-291-2015，批号201701）标准溶液100 mg/L，农业部环境保护科研监测所研制；乙腈、正己烷，色谱纯。
Agilent 7890B-7000C气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）；KQ-500DE型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；VORTEX SHAKER型涡旋仪（Qilinbeier公司）。
1.2 色谱条件
DB-35S毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）。色谱柱温度：初始温度130 ℃，保持1 min，10 ℃/min速率升至195 ℃，保持10 min；离子源温度230 ℃；进样口温度260 ℃；传输线温度280 ℃。载气高纯氦气（纯度99.999%）1.2 mL/min；进样量1.0 μL；定量方法：峰面积内标法。
1.3 农药标准储备液的配制 准确吸取每种标准溶液1.00 mL于10 mL的容量瓶内，用正己烷定容至刻度，即配成浓度为10.0 μg/mL的储备液。以标准储备液为基础分别配制浓度为0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 μg/mL的标准溶液。 1.4 考核样品的前处理
該试验中考核样品为苹果粉，苹果粉样品的前处理均采用如下3种方法。
1.4.1 方法一。称取苹果粉考核样0.5 g（精确至0.000 1 g），加入5.0 mL纯水和300 μL浓度为1.0 μg/mL的内标溶液，浸泡20 min，准确加入5.0 mL乙腈溶液，超声10 min，加入3～5 g氯化钠和5 g无水硫酸钠，涡旋混匀，离心3 min，将上清液完全转移至鸡心瓶中，于30 ℃水浴中减压蒸馏浓缩至净干，加入正己烷溶液进行定容，定容后进行GC-MS检测分析。
1.4.2 方法二。称取苹果粉考核样0.5 g（精确至0.000 1 g），加入5.0 mL纯水和300 μL浓度为1.0 μg/mL的内标溶液，浸泡20 min，准确加入5.0 mL乙腈溶液，超声10 min，加入3～5 g氯化钠，涡旋混匀，离心3 min，加入5 g 无水硫酸钠，取上清液直接进行GC-MS分析测定。
1.4.3 方法三。称取苹果粉考核样0.5 g（精确至0.000 1 g），加入5.0 mL纯水和300 μL浓度为1.0 μg/mL 的内标溶液，浸泡20 min，准确加入5.0 mL正己烷溶液，超声10 min，离心3 min，加入5 g 无水硫酸钠，取上清液直接进行GC-MS分析测定。
1.5 内控样品果汁的前处理 准确称取果汁内控样2.0 g（精确至0.000 1 g），加入300 μL浓度为1.0 μg/mL的内标溶液，浸泡20 min，按照考核样品前处理方法后续步骤进行处理，待GC-MS检测分析。
1.6 研究方法 分别考察3种前处理方法对考核样品和内控样品检测准确度的影响，并探究最有利于提高样品检测准确度的前处理方法，以提高检测的准确度。
2 结果与分析
2.1 线性关系与检出限 试验结果表明，在所选标准浓度0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 μg/mL范围内，线性关系良好。五氯硝基苯线性方程为y=0.531 88x-0.037 20，相关系数r为0.999 5。该方法的检出限为五氯硝基苯0.002 mg/kg。样品色谱图及质谱图见图1、2。
2.2 样品前处理方法对回收率的影响
分别称取考核样品 和已知样品，采用3种前处理方法进行处理，考察检测的精密度和加标回收率，经测定，采用方法一处理的考核样及内控样品，其回收率为50.31%～62.35%；采用方法二处理的考核样及内控样品，其回收率为83.23%～90.56%，并且乙腈对色素的提取能力较强，所以提取液经净化处理后，待测样液的颜色相对较深，对质谱和色谱柱的污染相对较大；采用方法三处理的考核样及内控样品，其回收率为98.90%～110.00%，且提取液经净化后，待测样液颜色相对较浅。
由表1可知，采用方法三进行前处理所得到的样品检测结果与指定值更吻合，结果更准确。
由表2可知，无论对于考核样品还是内控样品，经过方法三处理后其加标回收率均比另外2种方法更高，所以采用方法三进行前处理更有利于果蔬中五氯硝基苯的检测。
2.3 超声及涡旋条件的选择
该试验在加入提取试剂后分别采用涡旋10 min、超声10 min、超声10 min+涡旋5 min的方式对样品进行处理，试验结果表明，单独采用超声和涡旋提取的效果远没有采用超声再涡旋的提取效果好。因此，提取时宜先进行超声提取10 min，再进行涡旋5 min，这样更有利于目标物进入提取试剂中，其提取效果比较见图3。
3 结论
在果蔬五氯硝基苯残留检测过程中，采用正己烷直接提取，并采用超声后涡旋处理方式能在最大程度上提高样品检测的准确度。因此，样品前处理过程越简单越能有效提高提取效率，同时让试剂与样品充分接触的处理方式能有效提高
提取效果，从而提高检测的准确度。
参考文献
[1]赵丽， 师真， 张瑞雨，等.优化气相色谱-质谱法测定水果和蔬菜中五氯硝基苯残留量的前处理方法[J].食品安全质量检测学报，2017，8（9）：3619-3622.
[2] 赵丽， 董玉英， 荣国琼， 等.气相色谱-质谱法同时测定水果中五氯硝基苯·百菌清残留量[J].安徽农业科学， 2017， 45（9）：94-95.
[3] 朱惠芳，胡美华，胡贵祥.QuEChERS-气相色谱法测定水果中的五氯硝基苯[J].现代预防医学，2016，43（19）：3584-3585.
[4] 汤富彬，钟冬莲，徐玉祥，等.气相色谱法同时测定竹笋中毒死蜱、五氯硝基苯、氰戊菊酯和溴氰菊酯农药残留量[J].食品工业科技，2012，33（7）：362-364.
[5] 陈红平，刘新，汪庆华，等.气相色谱-质谱法同时测定茶叶中72种农药残留量[J].食品科学，2011，32（6）：159-164.
[6] 金永富，欧阳立群，吴富忠.蔬菜中五氯硝基苯残留量的高效液相色谱法测定方法[J].中国卫生检验杂志， 2011，21（2）：361-362.
[7] 宋家玉，周景洋，陈金东，等.毛细管气相色谱法测定保健食品、中药材中的五氯硝基苯残留[J].化学分析计量，2011，20（2）：55-57.
[8] 谢建军，陈捷，李菊，等.改良 QuEChERS 法结合气相色谱串联质谱测定果蔬中 20 种杀菌剂[J].食品安全质量检测学报，2013，4（1）：82-88.
[9] 朱攀，张攀，黄学仲，等.黄芪中五氯硝基苯残留量检测研究[J].实用预防医学，2011，18（1）：154，192.
[10] 中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.植物性食品中五氯硝基苯残留量的测定：GB/T 5009.136—2003[S].北京：中国标准出版社，2003.
[11] 朱小红，李涛，徐长根，等.中空纤维膜液相微萃取-气相色谱法测定天麻中五氯硝基苯[J].药物分析杂志，2010，30（12）：2283-2286.
[12] PAREJA L，CESIO V，HEINZEN H， et al.Evaluation of various QuEChERS based methods for the analysis of herbicides and other commonly used pesticides in polished rice by LCMS/MS [J].Talanta， 2011， 83（5）：1613-1622.
关键词 果蔬粉；五氯硝基苯；能力验证
中图分类号 TS207.5+3 文献标识码
A 文章编号 0517-6611（2018）14-0179-03
Study on the Ability to Verify the Quintozene in Apple Powder
ZHAO Li，ZHANG Ruiyu，LI Wenting et al （Kunming Municipal Center for Disease Control and Prevention，Kunming，Yunnan 650228）
Abstract [Objective]A multiresidue analytical ability was developed for determination of quintozene in apple by gas chromatomatographymass spectrometry （GCMS）.[Method]By using different pretreatment methods， different extraction solvents and purification methods were selected to explore the most favorable pretreatment method for sample inspection.[Result]In the concentration range of 0.01-0.05 μg/mL， this method had good linearity，in the 0.01-0.05 μg/mL standard within the scope of the recovery rate was 98.90%-110.00%.[Conclusion]Employing the method to verify quintozene can effectively improve the detection accuracy of test samples.
Key words Fruit and vegetable powder；Quintozene；Proficiency testing
随着国家对食品安全关注度的提高，食品安全风险监测已成为每年度检测工作的重要内容，而农药残留检测仍是食品安全风险监测的重要项目。近2年来果蔬中的五氯硝基苯（PCNB） 仍是农残检测的重要项目。五氯硝基苯属含氯有机氮保护性杀菌剂，化学性质稳定，不易挥发、氧化和分解，也不易受阳光和酸碱的影响，主要用于土壤和种子处理，在土壤中残效期长，使蔬菜、水果、中药材和饲料中时有残留[1-3]。
目前检测五氯硝基苯的方法有气相色谱法[4]、气相色谱-质谱联用法（GC- MS）[5] 、高效液相色谱法[6]。前处理方法通常为运用正己烷 （或石油醚）-丙酮多次提取，浓硫酸磺化法净化[7]，或采用硅镁吸附剂预处理小柱[8]、固相萃取或中空纤维膜液相微萃取技术[9]，虽然都取得了较好的效果，但由于反复提取的试剂较多，需经较长时间旋转蒸发，预处理柱也需经活化和淋洗，固相萃取及微萃取成本较高，在检测大批次样品时仍显不足。近年 QuEChERS前处理技术因其操作简单，成本低廉，有机试剂用量少，檢测时间短，被广泛应用于大批次农药残留检测中[10 -11]。2016 年，朱惠芳等[3]在农残分析中采用QuEChERS为样品前处理方法。该方法是运用一些高效的提取和净化试剂，通过简单的离心或柱分离，将农药成分与样品基质分离并通过此方法对样品进行提取和净化，但针对苹果粉中农药残留能力验证来说，以上方法仍不能有效提高样品检测的准确度[12]。因此针对基质相对简单的能力验证样品来说，以上方法都存在一定的提取损耗。笔者在以上研究的基础上进一步优化了苹果粉中农药残留能力验证样品检测的相关方法，以寻找到最有效、最有利于能力验证的方法，从而提高能力验证的准确度。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
果汁中五氯硝基苯内标质控样品（CFAPA-QC062B-12，大连中食国实检测技术有限公司）；五氯硝基苯（GSB05-1845-2016，批号201705）、顺式-环氧七氯（SB05-291-2015，批号201701）标准溶液100 mg/L，农业部环境保护科研监测所研制；乙腈、正己烷，色谱纯。
Agilent 7890B-7000C气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）；KQ-500DE型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；VORTEX SHAKER型涡旋仪（Qilinbeier公司）。
1.2 色谱条件
DB-35S毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）。色谱柱温度：初始温度130 ℃，保持1 min，10 ℃/min速率升至195 ℃，保持10 min；离子源温度230 ℃；进样口温度260 ℃；传输线温度280 ℃。载气高纯氦气（纯度99.999%）1.2 mL/min；进样量1.0 μL；定量方法：峰面积内标法。
1.3 农药标准储备液的配制 准确吸取每种标准溶液1.00 mL于10 mL的容量瓶内，用正己烷定容至刻度，即配成浓度为10.0 μg/mL的储备液。以标准储备液为基础分别配制浓度为0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 μg/mL的标准溶液。 1.4 考核样品的前处理
該试验中考核样品为苹果粉，苹果粉样品的前处理均采用如下3种方法。
1.4.1 方法一。称取苹果粉考核样0.5 g（精确至0.000 1 g），加入5.0 mL纯水和300 μL浓度为1.0 μg/mL的内标溶液，浸泡20 min，准确加入5.0 mL乙腈溶液，超声10 min，加入3～5 g氯化钠和5 g无水硫酸钠，涡旋混匀，离心3 min，将上清液完全转移至鸡心瓶中，于30 ℃水浴中减压蒸馏浓缩至净干，加入正己烷溶液进行定容，定容后进行GC-MS检测分析。
1.4.2 方法二。称取苹果粉考核样0.5 g（精确至0.000 1 g），加入5.0 mL纯水和300 μL浓度为1.0 μg/mL的内标溶液，浸泡20 min，准确加入5.0 mL乙腈溶液，超声10 min，加入3～5 g氯化钠，涡旋混匀，离心3 min，加入5 g 无水硫酸钠，取上清液直接进行GC-MS分析测定。
1.4.3 方法三。称取苹果粉考核样0.5 g（精确至0.000 1 g），加入5.0 mL纯水和300 μL浓度为1.0 μg/mL 的内标溶液，浸泡20 min，准确加入5.0 mL正己烷溶液，超声10 min，离心3 min，加入5 g 无水硫酸钠，取上清液直接进行GC-MS分析测定。
1.5 内控样品果汁的前处理 准确称取果汁内控样2.0 g（精确至0.000 1 g），加入300 μL浓度为1.0 μg/mL的内标溶液，浸泡20 min，按照考核样品前处理方法后续步骤进行处理，待GC-MS检测分析。
1.6 研究方法 分别考察3种前处理方法对考核样品和内控样品检测准确度的影响，并探究最有利于提高样品检测准确度的前处理方法，以提高检测的准确度。
2 结果与分析
2.1 线性关系与检出限 试验结果表明，在所选标准浓度0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 μg/mL范围内，线性关系良好。五氯硝基苯线性方程为y=0.531 88x-0.037 20，相关系数r为0.999 5。该方法的检出限为五氯硝基苯0.002 mg/kg。样品色谱图及质谱图见图1、2。
2.2 样品前处理方法对回收率的影响
分别称取考核样品 和已知样品，采用3种前处理方法进行处理，考察检测的精密度和加标回收率，经测定，采用方法一处理的考核样及内控样品，其回收率为50.31%～62.35%；采用方法二处理的考核样及内控样品，其回收率为83.23%～90.56%，并且乙腈对色素的提取能力较强，所以提取液经净化处理后，待测样液的颜色相对较深，对质谱和色谱柱的污染相对较大；采用方法三处理的考核样及内控样品，其回收率为98.90%～110.00%，且提取液经净化后，待测样液颜色相对较浅。
由表1可知，采用方法三进行前处理所得到的样品检测结果与指定值更吻合，结果更准确。
由表2可知，无论对于考核样品还是内控样品，经过方法三处理后其加标回收率均比另外2种方法更高，所以采用方法三进行前处理更有利于果蔬中五氯硝基苯的检测。
2.3 超声及涡旋条件的选择
该试验在加入提取试剂后分别采用涡旋10 min、超声10 min、超声10 min+涡旋5 min的方式对样品进行处理，试验结果表明，单独采用超声和涡旋提取的效果远没有采用超声再涡旋的提取效果好。因此，提取时宜先进行超声提取10 min，再进行涡旋5 min，这样更有利于目标物进入提取试剂中，其提取效果比较见图3。
3 结论
在果蔬五氯硝基苯残留检测过程中，采用正己烷直接提取，并采用超声后涡旋处理方式能在最大程度上提高样品检测的准确度。因此，样品前处理过程越简单越能有效提高提取效率，同时让试剂与样品充分接触的处理方式能有效提高
提取效果，从而提高检测的准确度。
参考文献
[1]赵丽， 师真， 张瑞雨，等.优化气相色谱-质谱法测定水果和蔬菜中五氯硝基苯残留量的前处理方法[J].食品安全质量检测学报，2017，8（9）：3619-3622.
[2] 赵丽， 董玉英， 荣国琼， 等.气相色谱-质谱法同时测定水果中五氯硝基苯·百菌清残留量[J].安徽农业科学， 2017， 45（9）：94-95.
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[4] 汤富彬，钟冬莲，徐玉祥，等.气相色谱法同时测定竹笋中毒死蜱、五氯硝基苯、氰戊菊酯和溴氰菊酯农药残留量[J].食品工业科技，2012，33（7）：362-364.
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[7] 宋家玉，周景洋，陈金东，等.毛细管气相色谱法测定保健食品、中药材中的五氯硝基苯残留[J].化学分析计量，2011，20（2）：55-57.
[8] 谢建军，陈捷，李菊，等.改良 QuEChERS 法结合气相色谱串联质谱测定果蔬中 20 种杀菌剂[J].食品安全质量检测学报，2013，4（1）：82-88.
[9] 朱攀，张攀，黄学仲，等.黄芪中五氯硝基苯残留量检测研究[J].实用预防医学，2011，18（1）：154，192.
[10] 中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.植物性食品中五氯硝基苯残留量的测定：GB/T 5009.136—2003[S].北京：中国标准出版社，2003.
[11] 朱小红，李涛，徐长根，等.中空纤维膜液相微萃取-气相色谱法测定天麻中五氯硝基苯[J].药物分析杂志，2010，30（12）：2283-2286.
[12] PAREJA L，CESIO V，HEINZEN H， et al.Evaluation of various QuEChERS based methods for the analysis of herbicides and other commonly used pesticides in polished rice by LCMS/MS [J].Talanta， 2011， 83（5）：1613-1622.