【摘 要】
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建立基于竞争酶联免疫分析(ELISA)的扁桃仁蛋白饮料中扁桃仁蛋白定量方法。使用双向电泳比较了扁桃仁和杏仁的蛋白质组上的差异,并且测序了杏仁prunin蛋白的氨基酸序列。鉴定
【基金项目】
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广东省质量技术监督局科技计划(2013CZ05)
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建立基于竞争酶联免疫分析(ELISA)的扁桃仁蛋白饮料中扁桃仁蛋白定量方法。使用双向电泳比较了扁桃仁和杏仁的蛋白质组上的差异,并且测序了杏仁prunin蛋白的氨基酸序列。鉴定,提取,纯化了扁桃仁分子量27 ku且p I 5.5~8.0的prunin蛋白亚基片段并且将其作为抗原制备特异性抗扁桃仁prunin蛋白单克隆抗体。使用单克隆抗体建立了检测扁桃仁蛋白的竞争酶联免疫分析方法。基于扁桃仁可溶全蛋白作为标准品,该方法的IC50为10.3μg/m L,线性范围为2.0~100μg/m L(R2=0.991)。该方法特异性良好,与杏仁和其他可食种子蛋白无交叉反应。样品前处理使用含有0.1%二硫苏糖醇(DTT)的7M尿素作为提取液。检测植物蛋白饮料样品的检出限为300μg/m L,相对标准偏差<10%。使用巴氏杀菌,超高温瞬时灭菌和高压灭菌的蛋白平均回收率分别为97%,93%和84%。
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