观察探讨糖尿病视网膜病变(DR)患者血浆中miR-1470的表达变化及可能机制。
方法住院治疗的30例DR患者(DR组)以及在眼科门诊检查的30例糖尿病患者(DM组)、30名正常健康者(正常组)纳入研究。抽取三组受检者静脉血5 ml,提取血浆总RNA,纯化。通过基因芯片筛选出在DR患者血浆中具有差异表达的miRNA,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证基因芯片检测结果。采用生物信息学预测miRNA调控的潜在靶基因,筛选出miR-1470及其靶基因表皮生长因子受体(EGFR)。将人视网膜内皮细胞(hREC)分为正常组(糖浓度5.5 mmol/L )、高糖组(糖浓度25.0 mmol/L )。将hREC转染miR-1470模拟物建立miR-1470高表达细胞模型,并将其分为空白对照组、高表达组、阴性对照组。采用RT-PCR检测细胞中miR-1470表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中EGFR蛋白表达。两组间计量资料比较采用独立样本t检验,多组间计量资料比较采用方差分析,组间计量资料两两比较采用多重比较。
结果RTPCR验证结果与基因芯片检测结果相符。DR组、DM组及正常组受检者血浆中miR-1470表达比较,差异有统计学意义(F=63.486,P=0.049)。与DM组和正常组比较,DR组患者血浆中miR-1470表达明显减弱,差异有统计学意义(q=111.2、73.9,P<0.05)。高糖组hREC中miR-1470表达明显低于正常组,差异有统计学意义(t=42.082,P=0.015)。高糖组hREC中EGFR蛋白表达明显高于正常组,差异有统计学意义(t=−39.939,P=0.016)。空白对照组、阴性对照组、高表达组hREC中miR-1470表达(F=637.069,P=0.000)、EGFR蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=122.908,P=0.000)。与空白对照组、阴性对照组比较,高表达组hREC中miR-1470表达明显升高(q=329.7、328.8,P<0.05),EGFR蛋白表达明显降低(q=242.5、234.6,P<0.05 ),差异均有统计学意义。阴性对照组与空白对照组hREC中miR-1470表达、EGFR蛋白表达比较,差异无统计学意义(q=1.5、7.9,P>0.05)。
结论DR患者血浆中miR-1470表达明显下调,EGFR表达增加可能与其有关。