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【摘要】本文测定了桦剥管菌(Piptoporus betulinus)在白桦木屑培养基中产甘露聚糖酶粗酶的部分酶学性质。结果显示甘露聚糖酶最适反应温度为50℃,最适反应pH值为6.0。
【关键词】桦剥管菌;甘露聚糖酶;酶学性质
本文研究了桦剥管菌分泌甘露聚糖酶的部分酶学性质,希望能为木材腐朽菌降解半纤维素的机制研究提供有用数据。
1.材料与方法
1.1材料
桦剥管菌(P. betulinus),为非褶菌目多孔菌科剥管菌属。
1.2主要试剂
甘露聚糖、D-甘露糖、3,5-二硝基水杨酸(DNS)。
1.3实验方法
(1)D-甘露糖标准曲线的绘制。pH 5.0 的NaAC-HAC缓冲液中,用紫外分光光度计在波长540nm处,绘制标准曲线。
(2)粗酶液酶活测量方法。在无菌操作条件下,将木屑培养基中桦剥管菌菌丝接种到PDA培养基平板上,培养7-10d;在培养基上钻取2个相同大小菌饼,产酶固体培养基中,23℃培养数天,测定酶活前取出菌饼;向培养中加入5倍质量的蒸馏水,浸泡12h后过滤,滤液于4000rpm离心10min,上清液用于甘露聚糖酶酶活性测定。
(3)酶学性质测定。在pH 3.0-9.0不同缓冲液条件下,测定木聚糖酶反应最适pH。在4℃条件下,将粗酶液分别于pH 3.0-9.0不同缓冲液中放置1h和24h,测定甘露聚糖酶酶活,探究pH对酶活稳定性的影响。最适pH条件下,分别测定30℃-90℃不同反应温度时酶活,确定酶反应最适温度。将粗酶液在30℃-90℃不同温度下分别保温1h和24h,在最适pH条件下测定酶活,探究温度对酶活稳定性的影响。
2.结果与分析
2.1酶反应最适pH及pH稳定性
取白桦木屑培养第18d菌样,以6.77‰甘露聚糖为底物,测不同pH条件下甘露聚糖酶酶活,结果如图2,pH4.5-7.0之间时酶活在50%以上;最适pH为6.0,pH 8.0时相对酶活下降为40%,pH 9.0时上升到50%以上。在4℃,将粗酶液不同pH值缓冲液中放置1h和24h后,测定甘露聚糖酶残存酶活力,结果如图3,甘露聚糖酶粗酶液在放置1h后,最适pH 6.0酶稳定性较好;pH4.5-6.5之间时相对酶活保持在75%以上;放置24h后,相对酶活均低于10%,说明桦剥管菌甘露聚糖酶的pH稳定性较差。
2.2酶反应最适温度及热稳定性
取白桦木屑培养第18d菌样,以6.77‰甘露聚糖为底物,酶反应最适温度及热稳定性如图4,50℃时酶活最大值。温度继续升高酶活下降,在30~60℃之间,相对酶活性保持在50%以上,70℃时残存酶活低于20%。分别在不同温度水浴中将酶液放置1h和24h,酶稳定性结果如图5:在低于50℃的水浴保温1h后,测得相对酶活随着处理温度的升高而逐渐升高;粗酶液在高于60℃的水浴保温1h后,相对酶活随处理温度升高而降低。在低于50℃的水浴保温24h后,相对酶活性在60%以上;高于70℃时,残存酶活性渐为下降,但高30%,酶热稳定性好,宜常温保存运输。
3.结论
以6.77‰甘露聚糖为底物,桦剥管菌(P. betulinus)产甘露聚糖酶最适pH为6.0,pH稳定范围在4.5-6.5之间,最适温度为50℃,耐受温度低于70℃,酶耐热性好,可以在常温保存运输。
参考文献
[1]魏玉莲,戴玉成.木材腐朽菌在森林生态系统中的功能[J].应用生态学报,2004,10:1935-1938.
[2]张婕,赵敏. β-甘露聚糖酶的研究进展[J].黑龙江医药,2011,24(2):248-250.
【关键词】桦剥管菌;甘露聚糖酶;酶学性质
本文研究了桦剥管菌分泌甘露聚糖酶的部分酶学性质,希望能为木材腐朽菌降解半纤维素的机制研究提供有用数据。
1.材料与方法
1.1材料
桦剥管菌(P. betulinus),为非褶菌目多孔菌科剥管菌属。
1.2主要试剂
甘露聚糖、D-甘露糖、3,5-二硝基水杨酸(DNS)。
1.3实验方法
(1)D-甘露糖标准曲线的绘制。pH 5.0 的NaAC-HAC缓冲液中,用紫外分光光度计在波长540nm处,绘制标准曲线。
(2)粗酶液酶活测量方法。在无菌操作条件下,将木屑培养基中桦剥管菌菌丝接种到PDA培养基平板上,培养7-10d;在培养基上钻取2个相同大小菌饼,产酶固体培养基中,23℃培养数天,测定酶活前取出菌饼;向培养中加入5倍质量的蒸馏水,浸泡12h后过滤,滤液于4000rpm离心10min,上清液用于甘露聚糖酶酶活性测定。
(3)酶学性质测定。在pH 3.0-9.0不同缓冲液条件下,测定木聚糖酶反应最适pH。在4℃条件下,将粗酶液分别于pH 3.0-9.0不同缓冲液中放置1h和24h,测定甘露聚糖酶酶活,探究pH对酶活稳定性的影响。最适pH条件下,分别测定30℃-90℃不同反应温度时酶活,确定酶反应最适温度。将粗酶液在30℃-90℃不同温度下分别保温1h和24h,在最适pH条件下测定酶活,探究温度对酶活稳定性的影响。
2.结果与分析
2.1酶反应最适pH及pH稳定性
取白桦木屑培养第18d菌样,以6.77‰甘露聚糖为底物,测不同pH条件下甘露聚糖酶酶活,结果如图2,pH4.5-7.0之间时酶活在50%以上;最适pH为6.0,pH 8.0时相对酶活下降为40%,pH 9.0时上升到50%以上。在4℃,将粗酶液不同pH值缓冲液中放置1h和24h后,测定甘露聚糖酶残存酶活力,结果如图3,甘露聚糖酶粗酶液在放置1h后,最适pH 6.0酶稳定性较好;pH4.5-6.5之间时相对酶活保持在75%以上;放置24h后,相对酶活均低于10%,说明桦剥管菌甘露聚糖酶的pH稳定性较差。
2.2酶反应最适温度及热稳定性
取白桦木屑培养第18d菌样,以6.77‰甘露聚糖为底物,酶反应最适温度及热稳定性如图4,50℃时酶活最大值。温度继续升高酶活下降,在30~60℃之间,相对酶活性保持在50%以上,70℃时残存酶活低于20%。分别在不同温度水浴中将酶液放置1h和24h,酶稳定性结果如图5:在低于50℃的水浴保温1h后,测得相对酶活随着处理温度的升高而逐渐升高;粗酶液在高于60℃的水浴保温1h后,相对酶活随处理温度升高而降低。在低于50℃的水浴保温24h后,相对酶活性在60%以上;高于70℃时,残存酶活性渐为下降,但高30%,酶热稳定性好,宜常温保存运输。
3.结论
以6.77‰甘露聚糖为底物,桦剥管菌(P. betulinus)产甘露聚糖酶最适pH为6.0,pH稳定范围在4.5-6.5之间,最适温度为50℃,耐受温度低于70℃,酶耐热性好,可以在常温保存运输。
参考文献
[1]魏玉莲,戴玉成.木材腐朽菌在森林生态系统中的功能[J].应用生态学报,2004,10:1935-1938.
[2]张婕,赵敏. β-甘露聚糖酶的研究进展[J].黑龙江医药,2011,24(2):248-250.