【摘 要】
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目的克隆人存活素(survivin)编码区基因并在大肠杆菌中表达。方法采用RT-PCR法得到人存活素编码区cDNA,克隆入原核表达载体pRSETB,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)PlyS,0.1m
【机 构】
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第四军医大学唐都医院骨科、全军骨科中心、全军骨肿瘤研究所
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目的克隆人存活素(survivin)编码区基因并在大肠杆菌中表达。方法采用RT-PCR法得到人存活素编码区cDNA,克隆入原核表达载体pRSETB,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)PlyS,0.1mMβ-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。结果获得人存活素编码区cDNA,构建原核表达载体pRSETB-survivin,转化菌株可表达人存活素蛋白,蛋白分子量约为20KD,蛋白表达量约为菌体总蛋白的13%。Western blot表明融合蛋白能与人存活素多克隆抗体特异性结合。结论获得人存活素编码区cDNA,并在大肠杆菌中表达了人存活素-组氨酸融合蛋白。
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