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目的
通过对艰难梭菌毒素B受体结合区进行基因克隆、表达，获得目的蛋白，为建立快速检测艰难梭菌的方法奠定基础。
方法复苏艰难梭菌，提取基因组DNA，PCR扩增目的基因，回收后与pGEM-T连接进行TA克隆，通过PCR、酶切及基因测序鉴定pGEM-T-CDB3。酶切pGEM-T-CDB3和pGEX-4T-1，回收CDB3和pGEX-4T-1，连接后转化大肠埃希菌BL21（DE3），构建重组质粒pGEX-4T-1-CDB3，然后应用IPTG诱导目的蛋白表达，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定目的蛋白大小和特异性。
结果经PCR扩增获得了艰难梭菌毒素B受体结合区（CDB3）基因全长片段1851 bp。克隆质粒pGEM-T与CDB3重组获得了质粒pGEM-T-CDB3，片段长为4800 bp左右。构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-CDB3，目的蛋白经诱导后获得表达。
结论原核蛋白表达载体pGEX-4T-1-CDB3构建成功，并大量表达出目的蛋白，将对艰难梭菌毒素B的快速检测和疫苗的研制奠定良好基础。（中华检验医学杂志,2013,36:324-328）