【摘 要】
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由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）自暴发以来，严重威胁着人类健康。建立一种快速、可靠、易操作的可用于SARS-CoV-2感染早期诊断的检测方法，对于疫情防控至关重要。SARS-CoV-2核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein,NP）是抗原检测的理想靶点。为了建立一种可快速对SARS-CoV-2 NP进行定量检测的诊断方法，本研究通过免
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
【基金项目】
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">中国医学科学院医学与健康科技创新工程（项目号：2020-I2M-2-014），题目：呼吸道病毒通用疫苗研发；
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由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）自暴发以来，严重威胁着人类健康。建立一种快速、可靠、易操作的可用于SARS-CoV-2感染早期诊断的检测方法，对于疫情防控至关重要。SARS-CoV-2核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein,NP）是抗原检测的理想靶点。为了建立一种可快速对SARS-CoV-2 NP进行定量检测的诊断方法，本研究通过免疫山羊制备羊抗SARS-CoV-2多克隆抗体并作为包被抗体，通过杂交瘤细胞技术制备鼠抗NP单克隆抗体并作为检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA抗原检测方法。对反应条件进行优化，并验证其线性范围及检测下限、敏感性、特异性、稳定性及准确度。结果显示，建立的方法检测线性范围为1 000 ng/mL～7.8 ng/mL,R2>0.99，检测下限为3.9 ng/mL；敏感性为96.875%，特异性良好，与Vero细胞、SARSCoV-2刺突蛋白、流感病毒等不发生交叉反应；批内和批间变异系数分别为2.1%～11.7%和4.3%～11.8%；检测样品回收率在94.3%～104.8%之间。结果表明，该方法特异性和稳定性好，敏感性和准确度高，可用于SARS-CoV-2NP定量检测。
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