【摘 要】
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目的 建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification RPA)快速鉴定鲍曼不动杆菌的实时荧光检测方法 . 方法 根据鲍曼不动杆菌16S-23S rRNA ITS基
【机 构】
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西南医科大学附属医院整形烧伤外科,四川泸州,646000;西南医科大学附属医院整形烧伤外科,四川泸州646000;四川省中医药科学院四川省中医药转化医学中心
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目的 建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification RPA)快速鉴定鲍曼不动杆菌的实时荧光检测方法 . 方法 根据鲍曼不动杆菌16S-23S rRNA ITS基因特异保守序列设计RPA引物与探针,采用铜绿假单胞菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌4种非鲍曼不动杆菌作为对照进行鲍曼不动杆菌实时荧光RPA特异性验证;对菌液进行梯度稀释后提取模板,验证方法的灵敏性;采用RPA检测30株鲍曼不动杆菌临床分离株,以验证方法 的临床应用性. 结果 建立的RPA扩增方法 在42 ℃条件下18 min内完成对鲍曼不动杆菌的快速检测,与对照菌相比,仅鲍曼不动杆菌呈现典型的扩增曲线;RPA检测鲍曼不动杆菌最低检出限为2.86 cfu/ml菌液,与PCR及实时荧光PCR结果一致.30株鲍曼不动杆菌临床分离株RPA检测均出现扩增曲线,检出率为100％. 结论 建立的鲍曼不动杆菌实时荧光RPA方法具有高特异、灵敏、简便、迅速等优点,可用于鲍曼不动杆菌感染快速检测.
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