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摘 要 为了快速得到大量优质脱毒的高档草莓种苗，选择幼芽和叶为外殖体，运用植物组织培养技术对草莓“章姬”和“红颊”两个品种进行植株快速繁殖研究，实验结果表明：在MS+IBA 2.0～4.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L中芽和叶均能产生大量愈伤组织，IBA越高，产生愈伤组织越快；丛生芽产生在MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 2.0～3.0 mg/L中，6-BA越高，增殖系数越大，可达6以上；根系形成在1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+AC 2 g/L中较好。由此法培养得到的种苗经大棚炼苗后用于生产，果大且产量高，甜而香，品质更优。
关键词：草莓；章姬；红颊；组织培养；快速繁殖
中图分类号：S668.4 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.08.016
草莓（Fragaria ananassa Duch）是多年生草本植物，水果为浆果类[1]。属于温带性植物，生长发育需要低温，15～25 ℃发育正常。对草莓有机化种植，使其果含有大量的糖类、蛋白质、氨基酸等多种营养物质，从色、香和味来，说均为佳品，被称为“水果中的皇后”。由于其酸甜适中且鲜美，大棚种植提前到每年11月上市，成为新春佳节少有新鲜的果品，深受人们喜爱[2，3]，采用到基地采摘形式，产量高，经济效益较为显著[4]。草莓优良品种繁育通常采用无性快繁方式来保证其品质的稳定性，获得优质和高产[4，5]。近年来，草莓优质种苗市场需求量大，采用常规繁育种苗，易感染病菌，几代后品质下降，开花着果率低，造成减产，无经济效益可言[6-8]。所以，运用组织快繁技术得到大量的脱毒苗，解决常规繁育种苗的易感病、结果率低的缺点，提高了草莓的产量和品质，经济效益十分突出[9]。
1 材料与方法
1.1 材料
从生长旺盛的章姬和红颊草莓植株中，选取幼嫩的茎尖和叶，用水冲洗30～60 min后备用。材料来自于黔南民族师范学院草莓基地。
1.2 消毒方法
将备用材料送到无菌接种室操作台上，用0.1%的氯化汞消毒5～7 min，再用无菌水冲洗5～6次。后将外殖体切好，接种到设计好的愈伤组织诱导培养基上进行培养。
1.3 培养条件
1.3.1 愈伤组织诱导培养基
①MS+IBA 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；②MS+IBA 3.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；③MS+IBA 4.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L。
1.3.2 丛生芽或继代增殖培养基
④MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L；⑤MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 2.5 mg/L；⑥MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 3.0 mg/L。
1.3.3 生根培养基
⑦1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+AC 2 g/L；⑧1/2MS+6-BA 0.5 mg/L；⑨1/2MS+AC 2 g/L。
培养室的温度为（20±2）℃，光照强度为2 000 LX，时长12 h/d。培养基的pH均为5.8。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织的诱导
将消毒好的材料分别切割接种到①②③培养基中诱导愈伤组织的产生，并标记（品种、接种时间、接种瓶数），之后每3 d观察记录生长状况，在20 d。在培养基上均愈伤组织的产生，且在①②③中依次产生的愈伤组织逐渐增多，说明随着IBA浓度越高，产生的愈伤组织就越多。
2.2 丛生芽的分化培养与继代增殖
将第一阶段培养的愈伤组织分别转接到培养基④⑤⑥中进行丛生芽分化培养，并记录（品种、转接时间、转接瓶数），每3 d观察1次。过30d后，在培养基④⑤⑥中出现丛生芽，将丛生芽转移继代培养，30 d后记录其产生的丛生芽数，发现增殖率分别为5.3、7.5、9.2，每种培养基上也有少量根的产生，说明在有一定IBA条件下，6-BA浓度高，增殖率越大。
2.3 生根培根
将较健状的丛生芽分离，接种到生根培养基⑦⑧⑨上进行生根培养，15 d后培养基⑦⑧⑨丛生芽出现了白色幼嫩的根，3周后，多条根出现。到45 d根系均为3条壮根以上，记录生根情况。发现在培养基⑦上的根为较粗而长，培养基⑧⑩上的根较短而细，说明在低营养、低6-BA和有活性碳的情况下，有利于生根，综合这些因素的效果更好。继续培养1～2周后，可移出培养室炼苗和移栽。
2.4 炼苗与移栽
将生根好的草莓组培瓶苗先移至大棚内，10 d开
启瓶盖，将其搁在大棚内5 d后，将苗取出，放在盆内把培养基洗掉后，栽种到腐质土的苗床上，喷水保温保湿，14 d后均看见幼叶长出，成活率达90%以上。在同样的种苗生产条件下，章姬和红颊两个品种均能得到优质种苗，但红颊的种苗较弱，但生活能力较强。
3 结论
通过试验研究，结果草莓章姬和红颊两个品种的愈伤组织培养的培养基为MS+IBA 2.0～4.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，丛生芽的分化与继代增殖培养基为MS+6-BA 2.0～3.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L，生根培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+AC 2 g/L，经在钢架大棚内炼苗后移植至腐殖土苗床上，成活率达90%以上，两个品种在种苗生产上表现具有显著差异。此研究结果为提高生产高档优质草莓品种的品质和产量提供基础，经济效益显著。
参考文献
[1]王敬东，张丽，马洪爱，等.植物生长调节剂TDZ在草莓花药培养中的应用[J].安徽农业科学，2011，14（5）：2588-2590，2622.
[2]李美林，张勇，朱丽君，等.草莓的组织培养研究进展[J].吉林农业，2013（4）：14-15.
[3]黄文江，潘超，阚显照，等.“红丰”草莓无菌系及叶盘再生系统的建立[J].西南农业学报，2010，23（5）：1640-1643.
[4]朱海生，潘东明，林义章，等.草莓高频离体再生体系的研究[J].西北植物学报，2007，27（5）：919-925.
[5]张利义，高遐虹，于同泉，等.草莓离体再生体系的研究[J].北京农学院学报，2004，19（2）：5-7.
[6]郭月玲，解振强，王永平.我国草莓组织培养生产研究现状及前景[J].浙江农业科学，2010，（6）：1211-1215.
[7]艾勇，赵佐敏，唐虹.草莓组织培养及产业化应用初步研究[J].种子，2002，125（5）：56-58.
[8]薛其勤，李美芹，吕金浮，等不同基因型优质草莓组织培养快繁研究[J].北方园艺，2014，37（21）：110-113.
[9]王连润，杨松光，胡忠荣，等.草莓试管苗移栽基质研究[J].西南农业学报，2010，23（4）：1374-137.
（责任编辑：刘昀）
关键词：草莓；章姬；红颊；组织培养；快速繁殖
中图分类号：S668.4 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.08.016
草莓（Fragaria ananassa Duch）是多年生草本植物，水果为浆果类[1]。属于温带性植物，生长发育需要低温，15～25 ℃发育正常。对草莓有机化种植，使其果含有大量的糖类、蛋白质、氨基酸等多种营养物质，从色、香和味来，说均为佳品，被称为“水果中的皇后”。由于其酸甜适中且鲜美，大棚种植提前到每年11月上市，成为新春佳节少有新鲜的果品，深受人们喜爱[2，3]，采用到基地采摘形式，产量高，经济效益较为显著[4]。草莓优良品种繁育通常采用无性快繁方式来保证其品质的稳定性，获得优质和高产[4，5]。近年来，草莓优质种苗市场需求量大，采用常规繁育种苗，易感染病菌，几代后品质下降，开花着果率低，造成减产，无经济效益可言[6-8]。所以，运用组织快繁技术得到大量的脱毒苗，解决常规繁育种苗的易感病、结果率低的缺点，提高了草莓的产量和品质，经济效益十分突出[9]。
1 材料与方法
1.1 材料
从生长旺盛的章姬和红颊草莓植株中，选取幼嫩的茎尖和叶，用水冲洗30～60 min后备用。材料来自于黔南民族师范学院草莓基地。
1.2 消毒方法
将备用材料送到无菌接种室操作台上，用0.1%的氯化汞消毒5～7 min，再用无菌水冲洗5～6次。后将外殖体切好，接种到设计好的愈伤组织诱导培养基上进行培养。
1.3 培养条件
1.3.1 愈伤组织诱导培养基
①MS+IBA 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；②MS+IBA 3.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；③MS+IBA 4.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L。
1.3.2 丛生芽或继代增殖培养基
④MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L；⑤MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 2.5 mg/L；⑥MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 3.0 mg/L。
1.3.3 生根培养基
⑦1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+AC 2 g/L；⑧1/2MS+6-BA 0.5 mg/L；⑨1/2MS+AC 2 g/L。
培养室的温度为（20±2）℃，光照强度为2 000 LX，时长12 h/d。培养基的pH均为5.8。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织的诱导
将消毒好的材料分别切割接种到①②③培养基中诱导愈伤组织的产生，并标记（品种、接种时间、接种瓶数），之后每3 d观察记录生长状况，在20 d。在培养基上均愈伤组织的产生，且在①②③中依次产生的愈伤组织逐渐增多，说明随着IBA浓度越高，产生的愈伤组织就越多。
2.2 丛生芽的分化培养与继代增殖
将第一阶段培养的愈伤组织分别转接到培养基④⑤⑥中进行丛生芽分化培养，并记录（品种、转接时间、转接瓶数），每3 d观察1次。过30d后，在培养基④⑤⑥中出现丛生芽，将丛生芽转移继代培养，30 d后记录其产生的丛生芽数，发现增殖率分别为5.3、7.5、9.2，每种培养基上也有少量根的产生，说明在有一定IBA条件下，6-BA浓度高，增殖率越大。
2.3 生根培根
将较健状的丛生芽分离，接种到生根培养基⑦⑧⑨上进行生根培养，15 d后培养基⑦⑧⑨丛生芽出现了白色幼嫩的根，3周后，多条根出现。到45 d根系均为3条壮根以上，记录生根情况。发现在培养基⑦上的根为较粗而长，培养基⑧⑩上的根较短而细，说明在低营养、低6-BA和有活性碳的情况下，有利于生根，综合这些因素的效果更好。继续培养1～2周后，可移出培养室炼苗和移栽。
2.4 炼苗与移栽
将生根好的草莓组培瓶苗先移至大棚内，10 d开
启瓶盖，将其搁在大棚内5 d后，将苗取出，放在盆内把培养基洗掉后，栽种到腐质土的苗床上，喷水保温保湿，14 d后均看见幼叶长出，成活率达90%以上。在同样的种苗生产条件下，章姬和红颊两个品种均能得到优质种苗，但红颊的种苗较弱，但生活能力较强。
3 结论
通过试验研究，结果草莓章姬和红颊两个品种的愈伤组织培养的培养基为MS+IBA 2.0～4.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，丛生芽的分化与继代增殖培养基为MS+6-BA 2.0～3.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L，生根培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+AC 2 g/L，经在钢架大棚内炼苗后移植至腐殖土苗床上，成活率达90%以上，两个品种在种苗生产上表现具有显著差异。此研究结果为提高生产高档优质草莓品种的品质和产量提供基础，经济效益显著。
参考文献
[1]王敬东，张丽，马洪爱，等.植物生长调节剂TDZ在草莓花药培养中的应用[J].安徽农业科学，2011，14（5）：2588-2590，2622.
[2]李美林，张勇，朱丽君，等.草莓的组织培养研究进展[J].吉林农业，2013（4）：14-15.
[3]黄文江，潘超，阚显照，等.“红丰”草莓无菌系及叶盘再生系统的建立[J].西南农业学报，2010，23（5）：1640-1643.
[4]朱海生，潘东明，林义章，等.草莓高频离体再生体系的研究[J].西北植物学报，2007，27（5）：919-925.
[5]张利义，高遐虹，于同泉，等.草莓离体再生体系的研究[J].北京农学院学报，2004，19（2）：5-7.
[6]郭月玲，解振强，王永平.我国草莓组织培养生产研究现状及前景[J].浙江农业科学，2010，（6）：1211-1215.
[7]艾勇，赵佐敏，唐虹.草莓组织培养及产业化应用初步研究[J].种子，2002，125（5）：56-58.
[8]薛其勤，李美芹，吕金浮，等不同基因型优质草莓组织培养快繁研究[J].北方园艺，2014，37（21）：110-113.
[9]王连润，杨松光，胡忠荣，等.草莓试管苗移栽基质研究[J].西南农业学报，2010，23（4）：1374-137.
（责任编辑：刘昀）