【摘 要】
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目的 克隆并测定嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统部分编码基因GspF和Gsp E的完整基因序列.方法 分别根据已获得的嗜麦芽寡养单胞菌D2株部分序列.以及GenBank收录的K279a和R
【机 构】
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青岛大学医学院微生物学教研室,山东青岛,266071
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目的 克隆并测定嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统部分编码基因GspF和Gsp E的完整基因序列.方法 分别根据已获得的嗜麦芽寡养单胞菌D2株部分序列.以及GenBank收录的K279a和R551株的序列依次设计3组引物,移步法PCR扩增GspF和E基因,产物纯化后连接pMD18T载体,经EcoRI和Hind Ⅲ双酶切鉴定后进行测序分析.将获得各PCR片段进行拼接.最终获得GspF和E基因的完整编码基因.并在GenBank中进行对比分析.结果 PCR先后扩增获得的3段序列,测序并拼接后发现其含有两个完整开放读码框架,分别为长1200 bp的GspF基因(GenBank收录号为GU377212.1)和长1 434 bp的GspE基因(GenBank收录号为HM151387).在GenBank中BLAST分析发现,D2株与嗜麦芽寡养单胞菌R551-3菌株的GspF基因及氨基酸序列同源性分别为93%和98%;GspE基因及氨基酸序列同源性与同菌种菌分别为92%和99%.结论 成功克隆出嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统基因簇中的GspF和GspE完整编码序列;嗜麦芽寡养单胞菌GspF和GspE种内高度保守,而其他细菌差异显著,提示其Ⅱ型分泌机制可能与其他革兰阴性菌有一定差异.
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