【摘 要】
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克隆山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV)的群抗原基因gag,并通过原核表达系统对gag进行表达研究.参照GenBank中收录的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2) gag基因序列设计1对特异引物
【机 构】
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四川农业大学动物遗传育种研究所,四川农业大学动物生物技术中心,四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川南江黄羊科学研究所,四川崇州市农村发展局
【基金项目】
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教育部长江学者和创新团队发展计划;
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克隆山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV)的群抗原基因gag,并通过原核表达系统对gag进行表达研究.参照GenBank中收录的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2) gag基因序列设计1对特异引物,以地方性鼻内腺癌(ENA)山羊鼻内分泌物中病毒RNA为模板,RT-PCR扩增获得目的片段,并将产物连接到pMD18-T载体获得阳性克隆(pMD18-gag)并测序.根据gag基因的ORF设计1对表达用引物进行亚克隆,并将ORF重组到pET-32,重组质粒转化至宿主菌Rostta中,用IPTG诱导表达,对表达的蛋白用SDS-PAGE分析,纯化表达产物,通过ELISA初步分析产物的反应原性.结果显示:克隆获得长2 249 bp的核酸序列(GenBank:HM104174),含有完整的ORF,与已报道的ENTV-2 gag基因的同源性高达87％,氨基酸水平上的同源性高达96.4％.表达产物大小约87 ku,与理论推理一致.采用ELISA方法检测表达产物未能与ENA阳性血清发生特异性反应.结果表明:gag基因在原核系统pET-32/Rostta中得到表达,表达产物与ENA阳性血清不具反应原性.
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