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【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白，获得具有良好抗原性的NS1′蛋白，并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验（DotELISA）方法，为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28aNS1为模板，PCR扩增NS1基因抗原性较好的区段NS1′，EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pET32a（+），构建pET32aNS1′，经PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定后，转化大肠杆菌Rosetta，用IPTG诱导表达，纯化NS1′并免