【摘 要】
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为研究II型草鱼呼肠孤病毒（GCRV）病毒样颗粒（VLPs）疫苗，实验利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统（BEVS）将具有免疫原性的GCRV-VP3/VP4/VP35蛋白进行GCRV-VLPs的组装。试验将编码VP35蛋白的GCRV-s11基因克隆入杆状病毒载体pFastBacHTATM，然后将鉴定正确的重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞，筛选得到重组穿梭质粒Bacmid-VP35。将穿梭质粒Ba
【基金项目】
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国家重点研发计划资助项目（2019YFD0900103）； 中国水产科学研究院珠江水产研究所基本科研业务费（2021SJ-XK1）； 国家大宗淡水鱼产业技术体系（CARS-45）； 广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金（2021KJ150）；
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为研究II型草鱼呼肠孤病毒（GCRV）病毒样颗粒（VLPs）疫苗，实验利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统（BEVS）将具有免疫原性的GCRV-VP3/VP4/VP35蛋白进行GCRV-VLPs的组装。试验将编码VP35蛋白的GCRV-s11基因克隆入杆状病毒载体pFastBacHTATM，然后将鉴定正确的重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞，筛选得到重组穿梭质粒Bacmid-VP35。将穿梭质粒Bacmid-VP35以及实验室前期构建的重组穿梭质粒Bacmid-VP3、Bacmid-VP4分别转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHB-VP4。利用Bac-PAK快速滴定试剂盒测定重组杆状病毒滴度，并通过间接免疫荧光（IFA）和蛋白质印迹法（Western blot）鉴定重组蛋白的表达情况。结果显示，实验获得了较高滴度的重组杆状病毒，并且重组蛋白在杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中正确表达。将成功表达蛋白的重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHB-VP4共感染Sf9细胞组装GCRV-VLPs，通过透射电镜（EM）观察VLPs的组装情况。结果显示，GCRV-II的3个蛋白在Sf9昆虫细胞中可以完成自我组装，形成与天然病毒结构形似的VLPs，直径大小为65-72 nm。本实验结果为进一步研制安全、高效的GCRV-VLPs疫苗奠定基础。
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