【摘 要】
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目的:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,将GFP基因克隆入pUC18建立大通量的筛选载体.方法:用PCR方法扩增目的DNA片段,碱裂解法小量制备质粒DNA,用限制性内切酶消化质粒DNA,
【机 构】
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河南职工医学院微生物学与免疫学教研室,郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
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目的:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,将GFP基因克隆入pUC18建立大通量的筛选载体.方法:用PCR方法扩增目的DNA片段,碱裂解法小量制备质粒DNA,用限制性内切酶消化质粒DNA,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA,GFP基因与pUC18连接,用氯化钙法转化感受态细胞,DNA序列测定,琼脂糖凝胶电泳,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果:pUC18-atg-GFP载体意外表达GFP蛋白,新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因,克隆入pUC18构建pUC18-GFP载体,通过PCR、酶切鉴定和
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