【摘 要】
：
目的 建立白蛋白(Alb)和角蛋白19 (CK19)双标记的胚胎干细胞系,并探讨其在肝祖细胞分化中的应用. 方法 构建含有Alb启动子的绿色荧光蛋白载体,并带有新霉素抗性,同时构建由
【机 构】
：
卫生部北京医院普外科,上海,中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所
论文部分内容阅读
目的 建立白蛋白(Alb)和角蛋白19 (CK19)双标记的胚胎干细胞系,并探讨其在肝祖细胞分化中的应用. 方法 构建含有Alb启动子的绿色荧光蛋白载体,并带有新霉素抗性,同时构建由CK19启动子启动红色荧光的载体,带有潮霉素抗性；将构建好的载体线性化后,同时电转胚胎干细胞El4.1,利用新霉素和潮霉素双筛选后,建立双标记基因修饰胚胎干细胞系El4.1-2；通过拟胚体形成及生长因子(骨形态发生蛋白4和碱性成纤维细胞生长因子)刺激的方法诱导产生肝祖细胞,经过流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应检测诱导效率.结果 构建了含有Alb启动子启动绿色荧光和CK19启动子启动红色荧光的载体,并证明了Alb和CK19启动子能特异启动各自蛋白的表达；建立了Alb和CK19双标记胚胎细胞系,并证明其具有多能性,显著表达多能性基因八聚体结合转录因子4和阶段特异性胚胎抗原1,在El4.1-2诱导分化22d后通过流式细胞术分选成功得到21.27％ Alb和CK19双阳性的肝祖细胞.结论 双标记胚胎干细胞的建立可以纯化和定量肝祖细胞,便于改进肝向诱导的方法及研究肝祖细胞特性.
其他文献
目的 调查重症监护病房(ICU)患者低磷血症的发生情况,研究不同血磷水平对患者预后的影响.方法 观察2010年4月至11月入住盛京医院ICU 147例患者的血磷水平及低磷血症的发生率,
目的 探讨丘脑海绵状血管畸形的手术治疗及预后.方法 对27例手术治疗的丘脑海绵状血管畸形的临床资料进行回顾性分析并随访评价.结果 27例患者共出血48次,术前KPS评分为(64.1
结合某小城镇污水处理厂工程实例，介绍了小城镇的特点及排污水量估算，探讨了自动化控制系统在小城镇污水处理所采用的生物处理工艺——“A2/O”法的工艺过程、监控及应用,并总
目的 实验证明交感神经活性增强与高血压的发生有关,我们研究的旨在探讨去神经术对犬高血压的治疗,并评估其有效性与安全性.方法18只杂种犬随机分为干预组(n=10)和对照组(n=8
近些年来国内外典型隧道火灾案例频频发生,阐明了隧道火灾的特点及危害性，已成为业界迫在眉睫的研究课题。本文通过分析国内外隧道火灾方面的研究，指出“试验研究”和“数值计
目的 探讨应用数字图像处理技术提取超声内镜图像纹理特征,运用于鉴别诊断胰腺癌和慢性胰腺炎的价值.方法 纳入2005年2月至2011年3月行内镜超声检查(EUS)的经病理确诊的202例
目的 探讨2009年国际妇产科联盟(FIGO 2009)分期标准在Ⅰ期子宫内膜样腺癌患者预后评估中的意义.方法 选取1995年1月至2008年2月间北京大学人民医院收治的244例FIGO 2009 Ⅰ
近年来煤矿是保障国民经济快速发展最重要的基础能源。搞好煤矿安全生产工作,切实保障人民群众的生命财产安全,体现了最广大人民群众的根本利益,反映了先进生产力的发展要求
目的 掌握饮水型地方性砷中毒(地砷病)病区降砷改水工程运行状况及地砷病病情,为饮水型地砷病的防治工作提供依据.方法 2010年,按照《饮水型地方性砷中毒监测方案(试行)的通
目的探讨体外诱导人骨髓基质干细胞(hMSCs)向结膜上皮样细胞(hCjEs)定向分化的可能性。方法体外分离、培养hMSCs和人hCjEs,分别从细胞形态学和免疫细胞化学的方法对细胞进行