【摘 要】
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作为当前广泛使用的转基因动物生产工具,CRISPR-Cas9系统已被应用于小鼠、猪、山羊及猴等物种.同时,多种针对于Cas9蛋白本身的突变及相应的转基因策略已经被提出以减少目前最广泛关注的脱靶效应问题,并取得了瞩目成绩.在本研究中,我们首次报道了利用单个Cas9缺口酶(Cas9n)来诱导在筛选出的位点上的基因插入并生产出了全基因组范围内没有可检测到的微小插入缺失(indels)的转基因牛.首先,我
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作为当前广泛使用的转基因动物生产工具,CRISPR-Cas9系统已被应用于小鼠、猪、山羊及猴等物种.同时,多种针对于Cas9蛋白本身的突变及相应的转基因策略已经被提出以减少目前最广泛关注的脱靶效应问题,并取得了瞩目成绩.在本研究中,我们首次报道了利用单个Cas9缺口酶(Cas9n)来诱导在筛选出的位点上的基因插入并生产出了全基因组范围内没有可检测到的微小插入缺失(indels)的转基因牛.首先,我们利用没有切割活性的双突变Cas9蛋白(dCas9)和针对于特定位点的sgRNA在牛胎儿成纤维(BFFs)上进行染色质免疫共沉淀测序(ChIP-seq),获得全基因组范围内的主要脱靶位点.然后,经由Cas9n介导的DNA单链断裂(SSB)与同源重组,我们成功获得了NRAMP1插入的转基因BFFs,并进一步通过体细胞核移植技术获得了转基因牛.最终,对比于野生型Cas9,Cas9n介导生产的转基因牛在ChIP-seq预测的脱靶位点上没有检测到indels.并且,我们进一步证明了转基因牛中插入的NRAMP1基因可以正确表达,并提高动物自身对于结核病的抗性.
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[目的]microRNAs是一类小分子非编码RNA (18-24nt),通过在转录后水平进行基因表达调控,从而广泛参与众多的生物进程.对于动物而言,寒冷是一种最常见的环境影响因素.为了明确冷应激状态下大鼠microRNAs的表达规律及其作用,我们进行了如下实验.[方法]我们建立了2个大鼠血清小RNA库,然后对这些小RNA进行了深度测序以及生物信息分析.实验所用大鼠分别利用的是常温和低温(4℃,12
胚胎着床是妊娠建立的先决条件。胚胎着床后,胚胎周围的基质细胞增殖和分化成为蜕膜细胞。而细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的重构是蜕膜化的一个特征。赖氨酰氧化酶(Lysyl oxidase,Lox)是一种铜依赖性单胺氧化酶,能够促使ECM中的胶原蛋白和弹性蛋白发生交联。在早期妊娠中,Lox的作用还未被研究过。经研究发现,Lox特异表达于小鼠妊娠第五天胚泡周围基质细胞中,第
镍和镍化合物广泛存在于自然界中,常应用于化学工业,可通过自然或人为途径排放到环境中,对人类与动植物造成严重危害.本研究选用1日龄肉鸡健雏280只,随机分为4组,每组70只,分别饲喂对照日粮和添加300 mg/kg,600 mg/kg,900 mg/kg氯化镍(NiCl2)的日粮,试验周期42天.14、28和42日龄时每组随机抽取5只肉鸡,取出肾脏,应用组织病理学、免疫组化、TUNEL、流式细胞术、
为了检测新发现的猪MAR序列(Sus scrofa MAR,SusMAR)在转基因中的作用效果,我们以PiggyBac (PB)载体为骨架,构建了MAR在不同位置的三种重组载体：包括MAR在β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)表达单元两侧和一个MAR在其上游或下游位置.并以牛的MAR序列(Bos taurus MAR,BosMAR)为阳性对照,其插入位点与SusMAR一致.
小RNA是一类非编码的RNA,在基因的转录后调节起到重要作用。长链脂酰COA合成酶1是在乳脂合成过程中的一个重要的酶。在前期研究,泌乳奶牛乳腺上皮细胞转录组对硬脂酸的应答实验中发现,miR-181a和ACSL1表达呈负相关,经过TargetScan和PicTar等生物信息学分析,ACSL1是miRNA的潜在靶基因。本研究的主要目的 是通过验证miRNA-181a和ACSL1之间的关系来确定miRN
雄性生殖干细胞(mGSCs)是一种在自我更新的前提下,逐级分化保证遗传信息传递的成体干细胞,对家畜而言,其表观修饰的深入研究不仅能更好的稳定体外建系,更是探究精子发生与雄性生殖机理的基础.Tet1作为DNA去甲基化的关键酶,是表观修饰的主要表现形式之一.我们对奶山羊进行Tet1的组织表达谱、Tet1及其产物5hmC在精子发生不同时期的细胞中表达变化及相关组蛋白甲基化波动分析.体外修饰发现Tet1的
肿瘤缺氧被认为是放疗(缺氧影响细胞放疗的敏感性)和化疗(缺氧细胞的增殖能力低以及药物浓度低)耐性的重要因素。某些厌氧或兼性厌氧细菌能够适应肿瘤这种缺氧和坏死的微环境,同时实体瘤的高通透性和滞留效应以及免疫逃逸又可以庇护细菌,使其增值复制,发挥抗肿瘤的作用。本实验选择的是奇异变形杆菌(ATCC 35659),Murata等发现奇异变形杆菌(RMS-203)具有溶瘤作用,且机体未产生不良反应。但该菌株
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