【摘 要】
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目的 构建一种向胰腺癌细胞安全、高效输送小干扰核糖核酸(siRNA)的免疫纳米载体.方法 检测纳米载体IONP-PEI(Iron oxide nanoerystals with earboxylie acid group-Polyethyleneimine,非靶向组)及其与siRNA复合物的表征；通过琼脂糖凝胶电泳检测siRNA结合力、MTS法检测细胞活力和流式细胞术检测转染率以确定其复合siRN
【机 构】
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510120 广州,中山大学孙逸仙纪念医院消化内科 中山大学附属第五医院消化科
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 构建一种向胰腺癌细胞安全、高效输送小干扰核糖核酸(siRNA)的免疫纳米载体.方法 检测纳米载体IONP-PEI(Iron oxide nanoerystals with earboxylie acid group-Polyethyleneimine,非靶向组)及其与siRNA复合物的表征；通过琼脂糖凝胶电泳检测siRNA结合力、MTS法检测细胞活力和流式细胞术检测转染率以确定其复合siRNA最佳N/P(charge ratio between amino groups of IONP-PEI and phosphate groups of siRNA)比值；细胞免疫荧光、普鲁士蓝观察scFvCD44v6 (the anti-CD44v6 single chain variable fragment)偶联IONP-PEI的靶向纳米载体(靶向组)在细胞内分布；流式细胞术、荧光显微镜观察、RT-PCR和Western印迹检测靶向组和非靶向组的转染率和转染siKRAS后的干扰效果.结果 IONP和PEI的最适质量比为0.75；纳米载体复合siRNA的最佳N/P比值为20；在该N/P比值下,IONP-PEI/siRNA复合物的电位为(21.73±8.07)mV,粒径为(51.3±2.2)nm.荧光显微镜显示非靶向组和靶向组转染后均在细胞内；靶向组的转染率为(89.75±1.81)％,高于非靶向组的(59.87±4.52)％；且靶向组的荧光强度高于非靶向组.转染siKRAS后的反转录PCR结果显示,靶向组的KRAS mRNA的相对表达量为(34.02±6.15)％,低于非靶向组的(51.09±6.70)％；Western印迹检测显示靶向组和非靶向组的KRAS蛋白表达量均低于对照组.结论 非靶向组和靶向组均能够将siRNA转染进细胞内,且靶向组具有更高的转染效率和更好的干扰基因表达效果.本课题构建的scFvcD44v6-IONP-PEI是一种高效、安全、靶向识别胰腺癌细胞的免疫纳米载体.
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