【摘 要】
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为研究大豆异黄酮能否激活乳腺癌细胞cAMP/PKA信号途径,抑制癌细胞增殖,应用放射免疫测定(RIA)、(γ-32P)ATP掺入和RT-PCR等方法,检测了药物处理后SHZ-88大鼠乳腺癌细胞内环腺苷酸(cAMP)的浓度、腺苷酸环化酶(AC)、磷酸二酯酶(PDE)和cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)的活性以及cAMP反应元件结合蛋白(CBEB)mRNA表达的变化.结果表明,与对照相比,分别用50μg
【机 构】
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南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室,南京,210095
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为研究大豆异黄酮能否激活乳腺癌细胞cAMP/PKA信号途径,抑制癌细胞增殖,应用放射免疫测定(RIA)、(γ-32P)ATP掺入和RT-PCR等方法,检测了药物处理后SHZ-88大鼠乳腺癌细胞内环腺苷酸(cAMP)的浓度、腺苷酸环化酶(AC)、磷酸二酯酶(PDE)和cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)的活性以及cAMP反应元件结合蛋白(CBEB)mRNA表达的变化.结果表明,与对照相比,分别用50μg/mL大豆黄酮和15μg/mL染料木素处理后,5min胞内cAMP的含量显著提高(P＜0.05),10min差异达极显著(P＜0.01),20min后开始回降;在实验处理时间内AC的活性不受影响;PDE的活性在5min时被显著抑制(P＜0.05),10min后逐渐回升;PKA的活性在20min时显著升高(P＜0.05),40min仍维持高水平(P＜0.05);CREB mRNA的表达量在3～6 h内显著提高(P＜0.05).提示,大豆异黄酮在抑制癌细胞增殖时,能够激活cAMP/PKA信号途径;而且是通过抑制磷酸二酯酶的活性,导致胞内cAMP浓度升高而实现的.
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利用RT-PCR技术扩增出岭南黄鸡γ干扰素(IFN-γ)基因,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行序列测定.再将克隆的IFN-γ基因插入到pET-32a质粒中构建原核表达载体,将其转化到Origami(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导获得了预期的表达蛋白,表达的融合蛋白占菌体蛋白的46％.菌体经超声裂解后离心取上清通过镍离子亲和树脂进行了纯化.纯化的蛋白酶切后获得重组鸡IFN-γ,经生物活性
本研究利用原核表达系统和杆状病毒表达系统分别表达了亨得拉和尼帕病毒核蛋白(N),以此免疫Balb/C小鼠,成功地制备了4株N蛋白单抗(2株抗NiV和2株抗HeV).Western Blot及间接免疫荧光检测表明4株单抗对2种病毒的N蛋白具有较强的交叉反应性,说明它们识别2种病毒上共同的抗原表位.随后,利用随机肽库技术和分段表达的N蛋白重叠多肽对4株单抗进行识别表位鉴定.结果发现了2个新的线性表位.
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