【摘 要】
：
采用片段重叠的PCR方法获得了兔出血症病毒WHNRH株除5和3末端以外的序列,采用应用锚引物的5RACE方法以及针对3末端的poly(A)结构设计引物获得了WHNRH株的5和3末端的非poly(A)序列,结果表明WHNRH株的全基因组序列为7437bp的.该株与其他毒株进行同源性比较分析,同源性在88.5％～97.1％之间;ORF1同源性为88.3％～97.1％,编码氨基酸序列的同源性为95.2％
【机 构】
：
四川农业大学动科院动物预防医学生物工程实验室,四川雅安,625014 四川农业大学动科院动物预防医
论文部分内容阅读
采用片段重叠的PCR方法获得了兔出血症病毒WHNRH株除5和3末端以外的序列,采用应用锚引物的5RACE方法以及针对3末端的poly(A)结构设计引物获得了WHNRH株的5和3末端的非poly(A)序列,结果表明WHNRH株的全基因组序列为7437bp的.该株与其他毒株进行同源性比较分析,同源性在88.5％～97.1％之间;ORF1同源性为88.3％～97.1％,编码氨基酸序列的同源性为95.2％～98.6％;ORF2的核苷酸序列同源性为92.1％～97.7％,编码氨基酸序列的同源性为93.2％～97.5％.采用长链RT-PCR技术成功扩增出WHNRH株的全长cDNA,并构建了T载体克隆pUCM-RHDV.本研究丰富了我国RHDV的基因组数据及分子流行病学内容,为具有感染性的RHDV体外转录本的获得,病毒基因组结构和功能研究奠定了基础.
其他文献
从发生免疫和生长抑制病的肉仔鸡中分离到了一种新的病毒,对其生长特性、理化特性、形态特性和核酸类型等方面进行了初步鉴定.该病毒粒子呈不规则的六边形,近似圆形或椭圆形,直径40～70nm.病毒核酸为双链RNA.能够在10日龄SPF鸡胚上生长,并引起鸡胚病变、死亡、矮化,增殖的高峰期为感染后72h,但不能在Vero细胞、PK15和鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长.该病毒对20％乙醚有较强的耐受性,对4.8
在国内外首次完成了番鸭源新城疫病毒分离株全基因组序列.用RT-PCR和5-RACE方法分段扩增出番鸭源新城疫病毒分离株FP1/02的16条cDNA片段,分别克隆到pMD18-T质粒载体并测序,经DNAstar软件进行拼接获得了番鸭源新城疫病毒FP1/02株全基因组序列.经测序结果表明,NDV FP1/02株与鹅源浙江株ZJ1和上海株SF02同源率分别为99.0％和99.1％,与鸡源NDV参考株He
选取国内1997-2005年间分离的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)24株,经蚀斑纯化克隆其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,结合在GenBank发表的36株国内外不同时期的NDV毒株,进行氨基酸遗传变异分析,并利用SPSS8.0软件对其不同片段的氨基酸进行同源相关比较.结果显示:所有国内NDV野毒氨基酸高度同源,同源率为94.4％～99.4％;而与疫苗株LaSo
在流行病学调查的基础上,分别用H5N1亚型禽流感病毒分离毒株A/Chicken/Huabei/2004、A/Duck/Guangxi/2004、A/Goose/Dongbei/2004对157羽鸽子分别经滴鼻、点眼、口服和肌肉注射的途径进行人工感染试验,攻毒剂量约为每羽份104EID50,试验设43羽鸽子为正常对照、9只SPF鸡为H5N1亚型禽流感病毒敏感动物攻毒对照.采用临床症状观察、病理剖解、
构建了惠阳胡须鸡IFN-α/pGEXT-6P-1的重组质粒,并在BL21中实现高效表达,利用glutathione sepharose 4B亲和层析柱对重组蛋白进行了纯化.重组ChIFN-α的抗病毒活性为3.16×106 U/mg.试验表明,纯化的重组蛋白在细胞水平和鸡胚水平上都表现出很高的抗禽流感病毒活性,当ChIFN-α分别达到100U与5000U时,对病毒繁殖的抑制率都可达到100％.
利用RT-PCR技术扩增出岭南黄鸡γ干扰素(IFN-γ)基因,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行序列测定.再将克隆的IFN-γ基因插入到pET-32a质粒中构建原核表达载体,将其转化到Origami(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导获得了预期的表达蛋白,表达的融合蛋白占菌体蛋白的46％.菌体经超声裂解后离心取上清通过镍离子亲和树脂进行了纯化.纯化的蛋白酶切后获得重组鸡IFN-γ,经生物活性
本研究利用原核表达系统和杆状病毒表达系统分别表达了亨得拉和尼帕病毒核蛋白(N),以此免疫Balb/C小鼠,成功地制备了4株N蛋白单抗(2株抗NiV和2株抗HeV).Western Blot及间接免疫荧光检测表明4株单抗对2种病毒的N蛋白具有较强的交叉反应性,说明它们识别2种病毒上共同的抗原表位.随后,利用随机肽库技术和分段表达的N蛋白重叠多肽对4株单抗进行识别表位鉴定.结果发现了2个新的线性表位.
为探讨单核细胞增多性李斯特菌H4株弱毒的分子基础,我们在分析其表型的基础上,对其主要毒力相关基因进行了系统测序和分析.体外试验表明:分离株H4与10403S菌株相比具有相似的溶血活性和细胞侵袭力,但具有更强的细胞黏附力、更高的细胞内增殖水平和更强的溶脂活性.而H4菌株对小鼠及鸡胚的LD50比10403S菌株毒力分别低2.7和4.8个对数.H4株毒力基因prfA、plcA、mpl和InlA与1040
采用TritonX-100裂解和0.6％ KI提取的方法制备绵羊肺炎支原体Y-98株外膜蛋白,经12％SDS-PAGE分析,表明其分子量范围在14.4～125.9KD之间;分别制备抗Y-98株全细胞抗原和外膜蛋白高免血清,经Western-blotting分析,表明外膜蛋白为绵羊肺炎支原体的主要保护性抗原,而在外膜蛋白,67.6KD、39.3KD和28.8KD多肽为其主要保护性抗原.利用ELISA
本研究从临床病料中分离鉴定出3株不同血凝性的兔出血症病毒(RHDV),命名为whn-1,whn-2,whn-3,其中whn-2株血凝效价为1∶640,whn-1,3的血凝效价仅为1∶5,1∶10.采用RT-PCR方法将whn株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序,并对其分子结构进行了比较分析,测序结果送往GenBank注册(注册号为DQ069280,DQ069281,DQ069282).并设计出1