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目的:MicroRNAs(miRNAs)被认为是一类对基因表达起负调节作用的基因产物。参与生命过程中一系列重要进程,包括早期发育、细胞增殖、细胞凋亡和细胞死亡等。miRNAs在正常细胞和肿瘤细胞中的表达不同,本研究目的是分析儿童急性淋巴细胞白血病患者MicroRNA(miRNA)的表达,研究miRNA在调控正常造血干细胞和白血病细胞中的机制,发现某些特异性miRNAs在调控白血病发生中的作用,为白血病的基因治疗提供依据。
方法:新诊断的前B和早前B急性淋巴细胞白血病(precursor B acutelymphoblasticleukemia,pre-B-ALL)息儿40例,对照组骨髓取自骨关节病手术并排除血液系统疾病的儿童。每例抽取骨髓5ml,密度梯度离心法分离出单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)加入含10%二甲亚砜和90%小牛血清的冻存液放入液氮保存。检测时,快速融化,提取1×106个细胞中的RNA。先使用基因芯片对6例pre-B-ALL患儿进行分析,筛选表达率高于对照2倍或低于对照0.5倍的基因,再应用实时定量PCR(qRT-PCR)在其它34例pre-B-ALL患儿中对上述基因进行验证。
结果:所检测的328个人类miRNAs,与正常儿童相比较,在pre-B-ALL病儿中,有6种miRNAs(hsa-IIliR.519e,hsa-miR-487b,hsa-miR-361,hsa-miR-142-3p,hsa-miR-222,hsa-miR-339)上调2倍以上,其中miR-339上调3.4倍。另有5种miRNAs(hsa-miR-451,hsa-miR-296,hsa-miR-373*,hsa-miR-485-3p_MM1,hsa-miR-483)在至少4位患者中下调2倍以上,其中miR-451仅为正常对照的0.11倍。我们利用实时定量PCR技术,对34例pre-B。-ALL患者进行了上述11种miRNAs含量的验证。结果证实,hsa-miR-339,hsa-miR-142-3p,hsa-miR-222平均上调2倍以上,而hsa-miR-451,hsa-miR-373*平均下调2倍以上。
结论:本研究为pre-B-ALL相关特异性基因的选择和白血病的基因治疗提供了资料。