用于阿糖鸟苷合成的腺苷脱氨酶在大肠杆菌中的表达

来源 :中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lllll15
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  铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨实现阿糖鸟苷的合成,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险.将铜绿假单胞菌TX16菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)克隆至载体pET-28a中,然后转化至到大肠杆菌(Escherichia coli BL21(DE3))经过筛选获得工程菌.经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(ITPG)诱导和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测及酶活测定,表明工程菌能够表达产生大量腺苷脱氨酶,其产酶能力是BL21菌株的16.2倍.以工程菌制备的粗酶液为催化剂进行阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨反应得到产物阿糖鸟苷,转化率可达96.8%.
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