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为了研究高效猪基因工程免疫增强剂,探讨IL-2,IL-6融合蛋白用作疫苗佐剂的免疫增强效果,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2(PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因并克隆入pQE-30原核表达载体中进行融合表达;通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIL-2-linker-PoIL-6)进行纯化。分别采用MTS法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白促猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖活,胜;分别采用PoIL-2和PoIL-6 ELISA试验方法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白与抗PoIL-2和PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性。结果表明:成功构建了PoIL-2-liner-PoIL-6嵌合基因及其重组原核表达质粒(rpQE-30/PoIL-2-linker-PoIL-6)。表达的rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分子量大小约28 ku,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分别具有与单一重组PoIL-2,PoIL-6蛋白(rPoIL-2、rPoIL-6)对照相近的生物学活性,可显著促进猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖,并可与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应。本研究初步证明了rPoIL-2-linker-PiIL-6蛋白在体外具有单rPoIL-2和rPoIL-6蛋白的双重生物学活性,为下一步进行rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在动物体内活性研究奠定了基础。