【摘 要】
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[目的]本文以南极磷虾为研究对象,通过酶法水解制备二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制活性产物,分离鉴定DPP-Ⅳ抑制肽,对其作用机制进行分子对接模拟研究,为其抗糖尿病功能食品的开发提供参考.[方法]南极磷虾由动物蛋白水解酶水解；采用荧光底物法(试剂盒法)分别测定DPP-Ⅳ抑制活性；利用超滤法(5000Da,3000Da,100Da超滤膜)进行酶解产物的分子量分级；高活性组分经Sephacryl-10
【机 构】
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广东海洋大学食品科技学院,广东湛江524088 广东海洋大学食品科技学院,广东湛江524088;广
【出 处】
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2016年中国水产学会水产品加工与综合利用分会学术年会
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[目的]本文以南极磷虾为研究对象,通过酶法水解制备二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制活性产物,分离鉴定DPP-Ⅳ抑制肽,对其作用机制进行分子对接模拟研究,为其抗糖尿病功能食品的开发提供参考.[方法]南极磷虾由动物蛋白水解酶水解；采用荧光底物法(试剂盒法)分别测定DPP-Ⅳ抑制活性；利用超滤法(5000Da,3000Da,100Da超滤膜)进行酶解产物的分子量分级；高活性组分经Sephacryl-100凝胶色谱柱进行层析分离；高活性组分进一步采用反相高效液相色谱分离纯化；纯化的组分通过三重四级杆飞行时间液质联用仪(QTOF-MS)鉴定DPP-Ⅳ肽的氨基酸序列；将得到的DPP-Ⅳ抑制肽和DPP-Ⅳ优化、对接,得到最佳结合模型,探讨DPP-Ⅳ抑制肽的作用机制.[结果]南极磷虾动物蛋白水解酶酶解产物具有较强的DPP-W抑制活性,其3000Da-100Da的超滤组分和进一步的Sephacryl-100凝胶层析分离的F1组分和反相高效液相色谱纯化的F1-1和F1-2具有最佳的抑制活性,其IC50分别为：8.33mg/ml,1.34mg/ml,0.53mg/ml和0.37mg/ml；经质谱分析F1-1和F1-2为2种DPP-Ⅳ抑制肽,其氨基酸序列分别为丙氨酸-脯氨酸(AP)和异亮氨酸-脯氨酸-丙氨酸(IPA).AP和IPA与DPP-Ⅳ的最佳分子对接模型稳定,显示两种DPP-Ⅳ肽的主要结合部位分别在DPP-Ⅳ的91-96和101-105号氨基酸处.[结论]南极磷虾的动物蛋白酶酶解物具有较强的DPP-Ⅳ抑制活性,其主要的活性成分是丙氨酸-脯氨酸(AP)和异亮氨酸-脯氨酸-丙氨酸(IPA)等肽类物质.南极磷虾是开发抗糖尿病肽类功能食品的潜在资源.
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