【摘 要】
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噬菌体在地球上种类最丰富。目前只观察到大约5500种噬菌体的电镜图,对554种噬菌体进行了基因组测序。分离和研究一株新的裂解效果好的噬菌体,将为其取代抗生素防治动物细菌
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噬菌体在地球上种类最丰富。目前只观察到大约5500种噬菌体的电镜图,对554种噬菌体进行了基因组测序。分离和研究一株新的裂解效果好的噬菌体,将为其取代抗生素防治动物细菌性疾病奠定基础。我们在江苏某地区猪场污水中分离到一株裂解性大肠杆菌噬菌体EEVP,属于有尾病毒目,肌尾病毒科,T4-like噬菌体,形态上为A1形态群,T偶数亚群。全基因组大小为169.158 kb,环状双链DNA。分子生物学软件预测该噬菌体具有273个开放性阅读框和2个tRNA,134个为保守性开放性阅读框。宿主谱较窄,能够感染大肠杆菌B株和K12株。电镜观察噬菌体形态;本实验采用PEG沉淀病毒颗粒法沉淀纯化噬菌体EEVP,苯酚/氯仿/异戊醇提取纯化基因组法提取EEVP基因组,基因组高通量测序方法测序。噬菌体EEVP全基因组大小为169.158 kb,环状双链DNA。分子生物学软件预测该噬菌体具有273个开放性阅读框和2个tRNA,其中保守的有134个开放性阅读框。蛋白质氨基酸序列与公共数据进行比较,通过gene的同源性进行功能注释。注释上NR、SWISS-PROT、TREMBL、CDD、PFAM库的基因分别为100%、75.1%、99.3%、41%、25.3%。电镜观察以及全基因组比对表明,该噬菌体属于有尾病毒目,肌尾病毒科,T4-1ike噬菌体;全基因组与NCBI GenBank中的Enterobacteria phage HX01核苷酸同源性最近,为99%。根据保守的gene18核苷酸序列比对,与噬菌体RB69同源性最高,为92%。经报道,噬菌体Enterobacteria phage HX01分离自养鸭场,宿主为鸭致病性大肠杆菌。噬菌体敏感性和裂解性试验表明,我们分离到的噬菌体EEVP宿主为大肠杆菌B株和K12株,能够裂解大肠杆菌基因工程菌株B株和K12株,如大肠杆菌BL21、TOP10、DH5α,但对我们所购买的大肠杆菌标准株C83903、C83917等均不敏感。了解噬菌体的特性和基因组序列,有助于下一步克隆表达噬菌体裂解酶和穿孔素,和应用于防治畜禽产品的细菌性疾病。
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