【摘 要】
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目的 肿瘤相关成纤维细胞(TAF)作为肿瘤微环境的重要组成部分,可影响肝细胞癌(HCC)的发生和进展.趋化因子是一类具有趋化特性的细胞因子,在肿瘤中发挥重要作用.本研究旨
【机 构】
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200003 上海长征医院消化内科
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 肿瘤相关成纤维细胞(TAF)作为肿瘤微环境的重要组成部分,可影响肝细胞癌(HCC)的发生和进展.趋化因子是一类具有趋化特性的细胞因子,在肿瘤中发挥重要作用.本研究旨在证明TAF可通过分泌趋化因子CCL2、CCL5和CXCL16,促进肝癌进展,并初步探讨其机制.方法 利用抗成纤维细胞磁珠分离并纯化人HCC组织中TAF和癌旁成纤维细胞(PTF),并应用细胞免疫荧光和RT-PCR对其进行鉴定；细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK8法)分别检测TAF和PTF,以及经TAF和PTF条件培养基培养后的肿瘤细胞的增殖能力,迁移实验检测TAF和PTF及经过TAF和PTF条件培养基培养后肿瘤细胞的迁移能力.将肿瘤细胞和分别加入TAF和PTF的细胞混悬液对裸鼠及NOD/SCID小鼠进行皮下成瘤,测量瘤体大小,荧光活体成像评价其促增殖和转移能力,蛋白芯片比较TAF和PTF培养上清液中趋化因子含量,迁移实验评价重组趋化因子CCL2、CCL5、CXCL16及其中和抗体促进肿瘤细胞迁移的能力,3TP双荧光素酶报告基因检测趋化因子对肿瘤细胞通路的活化能力.结果 TAF的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Vimentin表达高于同株PTF,而上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达低于PTF.RT-PCR表明,α-SMA、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)以及血小板衍化生长因子(PDGF)在TAF中的表达高于PTF； TAF增殖和迁移能力均高于PTF； TAF促肝癌细胞系增殖能力高于PTF；蛋白芯片及RT-PCR显示,TAF中CCL2、CCL5与CXCL16表达高于PTF；人类重组CCL2、CCL5和CXCL16因子均可提高肿瘤细胞的迁移能力,且呈剂量依赖性,其中和抗体可阻断其促迁移能力；CCL2和CCL5可激活Hedgehog通路,CXCL16可激活TGF-β通路.结论 TAF可通过分泌趋化因子CCL2、CCL5和CXCL16促进肝癌细胞的增殖、迁移、成瘤和转移,这种促进作用可能与激活肿瘤细胞TGF-β和Hedgehog通路有关.
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