【摘 要】
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目的 建立疾病特异性诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs),为此类疾病的发病机制、表观遗传学、药物筛选及诱导分化等方面的研究提供很好的细胞模型.方法 收集建立5种疾病成纤维细胞,包括杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)：基因exon16-42杂合重复；脊髓性肌萎缩(Spinal muscular atr
【机 构】
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广东省产科重大疾病重点实验室,广东省高校生殖与遗传重点实验室,广州医学院第三附属医院,广东省广州市 510150
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目的 建立疾病特异性诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs),为此类疾病的发病机制、表观遗传学、药物筛选及诱导分化等方面的研究提供很好的细胞模型.方法 收集建立5种疾病成纤维细胞,包括杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)：基因exon16-42杂合重复；脊髓性肌萎缩(Spinal muscular atrophy, SMA),SMN1基因exon7纯合缺失、exon8杂合缺失；橄榄体脑桥小脑萎缩(Olivopontocerebellar atrophy,OPCA)：SCA-3型；帕金森氏病(Parkinson Disease,PD)；肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS).运用逆转录病毒介导的四个转录因子(hOct4、hSox2、hc-Myc、hKlf4)重编程疾病成纤维细胞,筛选出iPSCs,对其进行多能性、体内外分化能力、核型及STR鉴定,并进行定向神经诱导分化.结果 疾病成纤维细胞在感染后第10-18天形态发生变化,第14-23天出现iPSCs克隆,重编程效率为0.3％-0.75％.筛选的iPSCs均能维持自我更新状态,在蛋白和mRNA水平上高表达全能性标志物；具有内、外分化能力；体外长期培养能维持正常核型；各iPSCs STR位点与对应的供体细胞完全相同；在特定培养条件下,能定向分化成具有神经特异性标记物的细胞,并表达相关电生理特性.结论 本研究建立的疾病特异性iPSCs,为此类疾病的发病机制、表观遗传学研究提供很好的模型；同时配合定向分化技术获得具有功能的终末细胞,为基因治疗和药物应用提供了良好的筛选平台.
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