【摘 要】
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目的 探讨NNK 暴露对人支气管上皮细胞16HBE 的增殖影响,以及环状RNA 在其中的调控作用.方法 采用不同浓度的NNK(0μM,50μM,100μM,200μM,300μM)对16HBE 细胞进行48h 染毒.通过CCK-8 和EdU 实验检测每组细胞的增殖活性,经流式细胞术分析每组细胞的周期分布情况,通过生物信息学预测细胞增殖调控相关的circRNA,经qRT-PCR 验证并挑选NNK 暴
【机 构】
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广州医科大学公共卫生学院化学致癌研究所呼吸疾病国家重点实验室,广州,511436
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的 探讨NNK 暴露对人支气管上皮细胞16HBE 的增殖影响,以及环状RNA 在其中的调控作用.方法 采用不同浓度的NNK(0μM,50μM,100μM,200μM,300μM)对16HBE 细胞进行48h 染毒.通过CCK-8 和EdU 实验检测每组细胞的增殖活性,经流式细胞术分析每组细胞的周期分布情况,通过生物信息学预测细胞增殖调控相关的circRNA,经qRT-PCR 验证并挑选NNK 暴露细胞中差异表达最为显著的circRNA.RNase R 酶处理16HBE 细胞总RNA 后,结合qRT-PCR 检测circRNA 的稳定性.敲减和过表达circRNA后,分别使用CCK-8 和EdU 实验检测16HBE 细胞的增殖活性,经流式细胞术分析细胞周期分布的改变情况.结果 不同浓度NNK 处理16HBE 细胞48h 后,与对照组相比,随NNK 染毒浓度增加,CCK-8 吸光度呈剂量依赖性降低,EdU 实验结果显示,300μM NNK 染毒组的细胞增殖抑制率最高.流式细胞术检测发现,NNK 处理导致16HBE 细胞G2/M 期的细胞百分比剂量依赖性增加.生物信息学预测筛选和qRT-PCR 验证后发现,环状RNA circNIPBL在NNK 暴露细胞中表达上调最为明显.RNase R 酶处理仅使该circRNA 的丰度小幅降低.敲减circNIPBL 后,CCK-8 实验结果表明NNK 染毒后的细胞增殖抑制减轻,EdU实验也发现circNIPBL 敲低后,增殖细胞阳性率也随之升高.流式检测结果显示,NNK暴露所致G2/M 期阻滞随circNIPBL 敲降而减轻.而circNIPBL 过表达后,CCK-8 实验显示NNK 暴露所致细胞增殖抑制进一步加重,EdU 实验也得到一致结果,流式细胞术则显示NNK 暴露所致G2/M 阻滞加重.结论 较高浓度NNK 暴露可引起细胞周期G2/M 期阻滞,从而抑制16HBE 细胞的增殖活性,circNIPBL 可通过调节细胞周期进展,加重NNK 暴露所致的16HBE 细胞增殖抑制.
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