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目的：探讨哈蟆油(OR)对D-半乳糖所致雌性衰老大鼠肝脏组织p16、p21 和cyclinD1 蛋白表达的影响，进一步探讨OR 延缓雌性大鼠机体衰老机制。
方法：SPF 级SD 雌性青年大鼠40 只随机分为模型组（D-gal 组）、维生素E（VE 组）、哈蟆油高剂量组(OR-H 组)、中剂量组(OR-M 组)、低剂量组(OR-L 组)，每组8 只，D-半乳糖颈背部皮下注42d，建立亚急性衰老模型。另取雌性青年大鼠8 只，同样部位每日注射生理盐水，作为空白组。第3 周开始灌胃给药，给药时间30 天。给药结束后，免疫组化法检测衰老大鼠肝脏组织p16 和p21 蛋白的表达情况，免疫印迹法（Western blotting）检测OR 对雌性衰老大鼠肝脏组织cyclinD1 表达的影响。
结果：雌性衰老大鼠肝脏组织免疫组化结果表明，p16 和p21 多为胞浆表达，弥漫性、灶性分布均有。D-gal 组p16 和p21 阳性细胞积分与空白组比较升高，差异有显著性( P＜0.01)。与D-gal 组相比，OR-M 和OR-L 组，p16 阳性细胞积分降低，差异有显著性( P值均＜0.01)，OR 各剂量组p21 阳性细胞积分降低，差异有显著性( P值均＜0.01)。肝脏组织Westernblotting 结果表明，D-gal 组肝脏组织cyclinD1 蛋白表达与空白组比较降低，差异有显著性( P＜0.01)。OR 各剂量组cyclin D1 蛋白表达与D-gal 组比较，表达均升高( P值均＜0.01)，OR-H 组尤为明显。
结论：OR 可降低肝脏组织p16、p21 蛋白的高表达。同时显著提高细胞增殖正性调控因子cyclinD1 蛋白的表达，促进衰老雌性大鼠肝细胞增殖。哈蟆油延缓雌性衰老作用可能通过调控肝脏p16，p21，cyclinD1 信号通路来促进有关增殖调控蛋白表达发挥延缓衰老作用。
方法：SPF 级SD 雌性青年大鼠40 只随机分为模型组（D-gal 组）、维生素E（VE 组）、哈蟆油高剂量组(OR-H 组)、中剂量组(OR-M 组)、低剂量组(OR-L 组)，每组8 只，D-半乳糖颈背部皮下注42d，建立亚急性衰老模型。另取雌性青年大鼠8 只，同样部位每日注射生理盐水，作为空白组。第3 周开始灌胃给药，给药时间30 天。给药结束后，免疫组化法检测衰老大鼠肝脏组织p16 和p21 蛋白的表达情况，免疫印迹法（Western blotting）检测OR 对雌性衰老大鼠肝脏组织cyclinD1 表达的影响。
结果：雌性衰老大鼠肝脏组织免疫组化结果表明，p16 和p21 多为胞浆表达，弥漫性、灶性分布均有。D-gal 组p16 和p21 阳性细胞积分与空白组比较升高，差异有显著性( P＜0.01)。与D-gal 组相比，OR-M 和OR-L 组，p16 阳性细胞积分降低，差异有显著性( P值均＜0.01)，OR 各剂量组p21 阳性细胞积分降低，差异有显著性( P值均＜0.01)。肝脏组织Westernblotting 结果表明，D-gal 组肝脏组织cyclinD1 蛋白表达与空白组比较降低，差异有显著性( P＜0.01)。OR 各剂量组cyclin D1 蛋白表达与D-gal 组比较，表达均升高( P值均＜0.01)，OR-H 组尤为明显。
结论：OR 可降低肝脏组织p16、p21 蛋白的高表达。同时显著提高细胞增殖正性调控因子cyclinD1 蛋白的表达，促进衰老雌性大鼠肝细胞增殖。哈蟆油延缓雌性衰老作用可能通过调控肝脏p16，p21，cyclinD1 信号通路来促进有关增殖调控蛋白表达发挥延缓衰老作用。