Caldicellulosiruptor saccharolyticus纤维二糖差向异构酶(CsCE)能够催化单一底物乳糖异构化生成乳果糖,是目前已知的酶法合成乳果糖中最为高效的酶.而全细胞生物催化剂相较于游离酶,在很多生物转化过程中具有明显的优势.本实验旨在制备一种透性化CsCE全细胞生物催化剂,并应用于催化乳糖生产乳果糖.研究结果表明：乙醇是一种高效的细胞透化试剂,能够有效破除细胞膜对酶与底物接触的阻碍作用.经40％ (v/v)乙醇处理15 min后的产CsCE细胞冻干后直接作为全细胞生物催化剂.在乳糖浓度600 g/L,80℃,pH 7.5,生物催化剂添加量12.5 U/mL的条件下,在不同缓冲液中经2h反应后,最终在Na2 HPO4-NaH2PO4缓冲液中乳果糖转化效率最高,乳果糖浓度达到390.59 g/L,生产率为195.3 g/ (L· h),乳糖转化率达到65.1％.同时研究还表明,Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液能促进乳果糖的转化,同时降低副产物依匹乳糖的生成,最终体系中依匹乳糖的含量仅为11.7 g/L,转化率小于2％.本实验为酶法制备高纯度乳果糖提供了一种新的途径,有助于工业上早日实现高产量、高转化率以及高纯度乳果糖的酶法生产.