【摘 要】
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目的 探讨组蛋白乙酰化参与微囊藻毒素-LR(MC-LR)诱导睾丸细胞凋亡的机制,研究组蛋白乙酰化的变化及其在MC-LR 致细胞凋亡和细胞周期阻滞中的作用.方法 用CCK-8 试剂盒测定半抑制浓度(IC50)为36 μg/mL,选择1/4 IC50、1/2 IC50 和IC50 浓度进行后续实验；培养原代支持-生精共培养细胞,将细胞分别用具有或不具有曲古抑素A(TSA)将其分为对照组,1/4 IC5
【机 构】
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郑州大学公共卫生学院,郑州,450001
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的 探讨组蛋白乙酰化参与微囊藻毒素-LR(MC-LR)诱导睾丸细胞凋亡的机制,研究组蛋白乙酰化的变化及其在MC-LR 致细胞凋亡和细胞周期阻滞中的作用.方法 用CCK-8 试剂盒测定半抑制浓度(IC50)为36 μg/mL,选择1/4 IC50、1/2 IC50 和IC50 浓度进行后续实验；培养原代支持-生精共培养细胞,将细胞分别用具有或不具有曲古抑素A(TSA)将其分为对照组,1/4 IC50 染毒组,1/2 IC50 染毒组,IC50 染毒组,IC50 染毒组+TSA 和TSA 组；BD AccuriTM C6 流式细胞仪进行了细胞周期分析；RT-qPCR 和Western Blot 分别检测相关凋亡基因和蛋白的改变；采用Annexin V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒联合流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 MC-LR 可增强原代支持-生精共培养细胞中组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)的活性,降低组蛋白乙酰化酶(HAT)的活性,上调HDAC1 的表达,并下调Ac-H3 和Ac-H4 的表达.同时增加凋亡相关基因Bax,Caspase3和Caspase8 的表达,最终导致细胞凋亡.此外,MC-LR 还诱导S 期细胞周期停滞,增加P21Wif1/Cip1 的表达,并抑制cyclinD1,cyclinE1,CDK2 和E2F1 的表达.HDAC 的抑制剂TSA 可以通过反向调节这些蛋白的表达来改善MC-LR 诱导的细胞凋亡和细胞周期停滞.结论 MC-LR 可通过增强HDAC 活性和降低正常睾丸细胞组蛋白乙酰化,激活线粒体凋亡途径,扰乱细胞周期途径,诱导细胞凋亡.因此,组蛋白乙酰化在MC-LR诱导的SD 大鼠睾丸细胞凋亡中具有重要作用,为MC-LR 诱导雄性大鼠生殖毒性的研究提供了新的视角.
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