【摘 要】
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目的：脂肪含量和肥胖相关基因(Fat mass and obesity associated gene,FTO)作为RNA 去甲基化酶,影响被修饰基因的表达,在肥胖以及肿瘤中起着重要的作用.DNA损伤应答在肿瘤发生发展中同样至关重要,但FTO 是否参与调节DNA 损伤应答及其机制相关研究较少,值得深入探讨.方法：使用不同DNA 损伤修复机制的化合物(DNA 交联剂、DNA 双链断裂剂、烷化剂和嘌呤
【机 构】
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上海交通大学医学院虹桥国际医学研究院/公共卫生学院 上海200025
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：脂肪含量和肥胖相关基因(Fat mass and obesity associated gene,FTO)作为RNA 去甲基化酶,影响被修饰基因的表达,在肥胖以及肿瘤中起着重要的作用.DNA损伤应答在肿瘤发生发展中同样至关重要,但FTO 是否参与调节DNA 损伤应答及其机制相关研究较少,值得深入探讨.方法：使用不同DNA 损伤修复机制的化合物(DNA 交联剂、DNA 双链断裂剂、烷化剂和嘌呤类似物)处理野生型与FTO 敲除人淋巴瘤母细胞TK6 细胞,通过比较染色体损伤、TK 基因突变考察FTO 缺失对DDR 的影响.同时,通过RNA 测序探索FTO 在DDR 中如何发挥作用,并用Western blotting(WB)与qRT PCR 进行验证,探讨相关分子机制.结果：敲除FTO 后,不同损伤修复机制化合物诱导的DNA 损伤增加,表现为微核增多,TK 基因突变升高,细胞凋亡增多以及G2/M 期阻滞减少.RNA 测序结果分析显示FTO敲除后抑制MAPK 通路以及DNA 损伤修复相关通路.WB 和qRT PCR 实验显示,FTO敲除抑制p38 MAPK 磷酸化并降低DNA 损伤修复相关通路相关基因(ERCC1、POLD3、RFC2)表达.qRT PCR 实验显示,在TK6 细胞中抑制p38 MAPK 通路可降低ERCC1、POLD3、RFC2 表达,提示FTO 通过p38 MAPK 通路引起DNA 损伤修复相关基因表达变化.作为FTO 作用底物,N6-甲基腺嘌呤对DNA 损伤药物无应答,提示FTO 参与的DNA 损伤修复可能不依赖于N6-甲基腺嘌呤.结论：综上所述,本研究证明FTO 与DNA 损伤应答密切相关,p38 MAPK 是其参与调控DNA 损伤修复的主要通路.
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